Développement d'une lignée cellulaire de gonocytes foetaux de rat pour l'évaluation toxicologique de polluants environnementaux.

Joao, Fabien (2017). Développement d'une lignée cellulaire de gonocytes foetaux de rat pour l'évaluation toxicologique de polluants environnementaux. Mémoire. Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en sciences expérimentales de la santé, 89 p.

Prévisualisation

PDF - Version publiée Télécharger (3MB) | Prévisualisation

Résumé

Les gonocytes, précurseurs foetaux de toute la lignée germinale, sont sensibles aux perturbateurs endocriniens (PE). Afin de créer un modèle permettant d’étudier les mécanismes de dérégulation causés par les PE directement dans les gonocytes, nous proposons d’établir une lignée cellulaire de gonocytes foetaux. Nous utilisons ici un modèle de rats qui expriment la protéine fluorescente verte (GFP) spécifiquement dans les cellules germinales. Les gonocytes en prolifération sont obtenus par tri en cytométrie en flux (FACS) à partir de testicules explantés au 16ème jour de gestation. Nous avons testé les conditions de culture primaire dans différents milieux, et sur différents supports. Les cellules GFP-positives se cultivent le mieux sur la laminine, dans un milieu MEMα additionné de basic Fibroblast Growth Factor (bFGF), Leukemia Inhibiting Factor (LIF) et Stem Cell Factor (SCF). Après transfection avec un vecteur d’immortalisation contenant l’antigène large T SV40-mCherry, nous avons obtenu deux lignées de cellules immortalisées, positives pour la mCherry mais étonnamment négatives pour la GFP. La caractérisation cellulaire par microscopie électronique et immunofluorescence suivie d’une caractérisation moléculaire par RT-qPCR et pyroséquençage suggère un caractère somatique aux cellules de ces lignées. Nos données actuelles ne permettent pas encore d’identifier précisément la nature des cellules immortalisées. Des expériences complémentaires permettront d’identifier le type cellulaire de ces lignées afin de déterminer si ces dernières sont de bons modèles pour évaluer les effets directs des PE sur le développement du testicule foetal.

Gonocytes, the fetal precursors of the entire germ line, are sensitive to endocrine disruptors. To generate a model to resolve the deregulation mechanisms caused by endocrine disruptors directly in gonocytes, we propose to establish a fetal gonocyte cell line. Here, we use a rat model where the Green Fluroescent Protein (GFP) is only expressed in the germ cells. The proliferating gonocytes are obtained by flow cytometry (FACS) from testes explanted at 16 days of gestation. We tested the conditions of primary culture in different media, and on different coatings. The GFP-positive cells are best grown on laminin, in MEMα medium supplemented with basic Fibroblast Growth Factor (bFGF), Leukemia Inhibiting Factor (LIF) and Stem Cell Factor (SCF). After transfection with an immortalization vector containing the SV40-mCherry large T antigen, we obtained two immortalized cell lines positive for mCherry, but surprisingly negative for GFP. The cellular characterization by electron microscopy, immunofluorescence and the molecular characterization by RT-qPCR suggest that these cells maybe somatic in nature. However, our data do not make it possible to identify the cell type. Further experiments will allow the characterization of these cell line in order to determine if they are a good model for evaluating the direct effects of endocrine disruptors on the fetal testis.

Type de document:	Thèse Mémoire
Directeur de mémoire/thèse:	Delbès, Géraldine
Mots-clés libres:	gonocytes, foetal, GFP, lignée de cellules immortalisées, perturbateurs endocriniens, culture cellulaire, gonocytes, fetal, GFP, immortalized cell line, endocrine disruptors, cell culture
Centre:	Centre INRS-Institut Armand Frappier
Date de dépôt:	29 avr. 2018 05:34
Dernière modification:	11 mai 2023 18:41
URI:	https://espace.inrs.ca/id/eprint/6693

Gestion Actions (Identification requise)

Modifier la notice