A la recherche de sequences liant l'endotheline-1

Louimaire, Alexandra (2005). A la recherche de sequences liant l'endotheline-1 Mémoire. Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en sciences expérimentales de la santé, 71 p.

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Résumé

L'endothéline (ET) est un peptide de 21 acides aminés caractérisé par une vasoconstriction puissante et soutenue. Il possède également un pouvoir mitogène et inotrope en plus d'influencer l'homéostasie rénale et altérer l'activité centrale et sympathique du système nerveux périphérique. Ces diverses actions sont médiées par le biais de récepteurs vasculaires présents dans les des muscles lisses et les cellules endothéliales nommés ETA et ETB . Malgré les progrès notables dans le développement de traitements thérapeutiques tels la découverte de bloqueurs des récepteurs ou de sa biosynthèse, cette étude propose une nouvelle stratégie qui cible le blocage de l'ET à ses récepteurs par la liaison d'un intennédiaire spécifique à l'ET. Dans la perspective d'identifier de nouveaux inhibiteurs de l'ET-1, la technique de banque de phage (phage display), qui encadre les principes de chimie combinatoire et de biologie, a été utilisée. La technique de phage display ou présentation sur phage, est une méthode révolutionnaire utilisée dans plusieurs laboratoires pour l'identification de ligands nécessaires dans la recherche de nouveaux médicaments. À partir des librairies peptidiques construites et exposées à la surface du bactériophage, une panoplie de ligands est disponible pour l'isolation de molécules spécifiques sans études laborieuses sur la caractérisation antigénique ou structurelle du ligand. Les séquences ainsi sélectionnées contre l'ET-1 seront en mesure de déstabiliser la liaison du peptide envers ses récepteurs. Le criblage in vitro a été effectué via une librairie aléatoire de 20 acides aminés fusionnée à la partie C-tem1inale du gène codant pour la protéine 1OB de la capside du phage T7. La sélection de cette librairie face à l'ET immobilisé sur support a permis d'obtenir 36 clones dont les séquences variaient de 4 à 31 acides aminés. Trois motifs : LXXFXVSISXFXXA, ALXSXXXSIS, PWQLXEXXSIS ce sont distingués suite à un alignement multiple des séquences. La fréquence de certaines séquences répétées ainsi que les motifs identifiés ont pennis la synthèse de cinq peptides nommés endothelin binding peptides. Afin de détenniner si la contribution des acides aminés identifiés sont importants à la liaison des peptides sélectionnées, des études d'affinité et d'inhibition de l'activité biologique de l'ET ont été entreprises. Une IC50 moyenne de 50 uM a été calculée pour les cinq peptides. Toutefois, les analyses par résonance plasmonique de surface se sont révélées contradictoires car aucune liaison spécifique n'a été enregistrée. En ce qui a trait aux études d'inhibition de liaison de l'ET à ses récepteurs, une légère perte a été enregistrée sous l'action d'une forte concentration de peptides. Cependant aucune inhibition de l'activité de l 'ET n'a été observée suite à des essais pham1acologiques effectués sur des préparations tissulaires d'aorte de rat. En prenant compte de certains paramètres qui peuvent avoir influencé les résultats observés, des ajustements peuvent être effectués afin d'optimiser les séquences et favoriser une meilleure affinité.

Type de document:	Thèse Mémoire
Directeur de mémoire/thèse:	Fournier, Alain
Mots-clés libres:	endotheline ; peptide ; et ; recepteur
Centre:	Centre INRS-Institut Armand Frappier
Date de dépôt:	03 juill. 2013 18:00
Dernière modification:	08 déc. 2015 15:41
URI:	https://espace.inrs.ca/id/eprint/244

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