Stratégies d’immunisations pour la production d’anticorps monoclonaux contre des récepteurs de cellules NK murines.

Blouin, Karine (2002). Stratégies d’immunisations pour la production d’anticorps monoclonaux contre des récepteurs de cellules NK murines. Mémoire. Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en virologie et immunologie, 129 p.

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Résumé

Les cellules NK expriment de nombreux récepteurs en surface cellulaire. La famille de récepteurs NK murins concernée par le projet est appelée Ly49. Cette famille de récepteurs est apparentée aux lectines de type-C. Nous , nous sommes intéressées plus précisément aux récepteurs Ly49E, F, H. Le répertoire des cellules NK est très complexe. Une seule cellule NK peut co-exprimer plusieurs récepteurs à sa surface, ce qui rend difficile l'étude du rôle d'un récepteur particulier. Les récepteurs Ly49 présentent une forte homologie de séquences en acides aminés dans leur portion extracellulaire. Sur cette base, des groupes d'homologie ont été définis au sein de la famille Ly49. Un de ces groupes comprend les récepteurs d'intérêts Ly49E, F et H qui sont très semblables entre eux. De plus, les populations qui expriment ces trois récepteurs sont de faible taille. Ce sont là autant d'obstacles limitant la production d'anticorps monoclonaux qui reconnaissent sélectivement chacun de ces récepteurs. L'objectif du projet de maîtrise était de produire des anticorps monoclonaux réagissant uniquement avec les récepteurs Ly49E, F et H. Afin de valider la méthodologie employée, nous avons cru bon ajouter à l'étude un récepteur fortement exprimé à la surface des cellules NK, c'est-à-dire l'hétérodimère CD94/NKG2A. La stratégie que nous avons développée était d'utiliser comme outils des phages recombinants permettant d'aller chercher des hybridomes producteurs d'anticorps d'une spécificité prédéterminée. Des séquences cibles ont été identifiées dans le domaine extracellulaire des récepteurs visés puis des oligonucléotides ont été synthétisés et insérés dans le phage fUSES. De bons rendements ont été obtenus. Une fois la banque de phages établie, le système de criblage ELISA a été mis au point. Les paramètres optimaux ont été déterminés. Les phages ont ensuite été utilisés pour le criblage des sumageants d'hybridomes. Pour la production d'anticorps, plusieurs protocoles d'immunisations ont été employés. D'abord, des cellules LAK ont été injectées à plusieurs reprises à des rats de différentes souches. Suite aux fusions, autant le pourcentage de puits contenant des hybridomes que le pourcentage d'hybridomes sécrétant des anticorps a été faible. Aucun hybridome produisant des anticorps réagissant spécifiquement avec un seul phage n'a été repéré. Dans un second temps, des phages recombinants ont servi d'immunogène. Des anticorps dirigés contre le phage ont pu être détectés, mais aucune réactivité avec l'épitope inséré n'a été décelée. Finalement, des thymocytes fœtaux ont été utilisés comme immunogène. Les rendements obtenus suite aux deux fusions ont également été faibles et aucun anticorps de la spécificité désirée n'a pu être dépisté. En conclusion, malgré la diversité des protocoles d'immunisations utilisés, il n'a pas été possible de produire de réactif spécifique à aucun des récepteurs visés. L'instabilité des hétérohybridomes ainsi que la fragilité du partenaire de fusion pourraient expliquer le petit nombre d'hybridomes obtenus. En immunisant avec des phages recombinants, il a cependant été possible de détecter une réactivité avec le phage, mais non avec l'épitope cible.

Type de document:	Thèse Mémoire
Directeur de mémoire/thèse:	Lemieux, Suzanne
Mots-clés libres:	anticorps ; monoclonal ; ly49e ; ly49h ; ly49f ; recepteur ; nk ; cellule ; rat
Centre:	Centre INRS-Institut Armand Frappier
Date de dépôt:	16 sept. 2015 14:04
Dernière modification:	14 déc. 2015 20:05
URI:	https://espace.inrs.ca/id/eprint/2302

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