Protéines chaperonnes impliquées dans le repliement des protéines sécrétées par le système TAT chez Streptomyces Lividans

Groleau, Marie-Christine (2006). Protéines chaperonnes impliquées dans le repliement des protéines sécrétées par le système TAT chez Streptomyces Lividans Mémoire. Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en microbiologie appliquée, 137 p.

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Résumé

Les protéines dont le destin est d'être sécrétées sont synthétisées sous la forme d'un précurseur qui possède à son extrémité N-terminale une séquence appelée peptide signal qui est clivé lors de la sécrétion pour libérer la protéine. La majorité des protéines sécrétées par les bactéries le sont par la voie de sécrétion Sec. Cette voie déjà largement étudiée permet la sécrétion de précurseurs protéiques maintenus non repliés dans le cytoplasme. La voie Tat (twin-arginine translocation) est nouvellement étudiée et permet la translocation de précurseurs déjà repliés dans le cytoplasme. Les précurseurs Tat se distinguent par la présence d'une séquence signature (S/T)-R-R-X-F-L-K dans leur peptide signal. Des protéines chaperonnes seraient impliquées dans le repliement des précurseurs Tat. En effet, les chaperonnes peuvent prévenir l'agrégation et la dégradation de protéines sous conformation non-native et favoriser leur repliement. Streptomyces coe/icolor est la bactérie possédant le plus grand nombre de substrats Tat parmi les 84 génomes bactériens étudiés, ce qui en fait un organisme intéressant pour l'étude de ce système. Plusieurs enzymes d'intérêt industriel, dont les xylanases, sont sécrétées par Streptomyces lividans, une proche parente de S. coelicolor. La xylanase C (XlnC), une enzyme exclusivement sécrétée par le système Tata servi de modèle pour l'étude du système Tat chez S. lividans. Pour cette étude, il s'agissait de purifier le précurseur contenu dans la fraction cytoplasmique en espérant purifier du même coup les protéines chaperonnes qui lui sont associées. Des expériences se basant sur l'affinité d'un précurseur pour sa chaperonne potentielle ont été effectuées. Trois techniques ont été testées soient la co­ immunoprécipitation avec des anti-XInC et deux types de colonnes d'affinité (xylanase C immobilisée à l'aide d'une queue d'histidine sur colonne HiTrap et xylanase C immobilisée sur gel de sépharose activé au CNBr). Plusieurs protéines ont été recueillies, séparées par SDS-PAGE et identifiées par LC/MS. Les protéines pouvant avoir potentiellement des fonctions de chaperonnes ont été analysées plus en détails. Parmi celles-ci se retrouvent une protéine de stress, une peptidyl-prolyl isomérase et une protéinase. Un système double hybride avec la yellow .fluorescent protein (YFP) est présentement en construction afin de confirmer l'interaction entre la XlnC et les chaperonnes hypothétiques. Des souches hyperproductrices. de deux peptidyl-prolyl isomérases (CypA et CypB) ont également été construites afin de vérifier l'impact de la surproduction de ces chaperonnes sur la sécrétion de la XlnC (Tat-dépendante) et de la XlnA {Sec-dépendante). Une inhibition de l'activité xylanasique est observée pour les deux systèmes de sécrétion, bien que les deux xylanases se retrouvent dans le surnageant de culture.

Type de document:	Thèse Mémoire
Directeur de mémoire/thèse:	Morosoli, Rolf
Mots-clés libres:	proteomique ; proteine ; tat
Centre:	Centre INRS-Institut Armand Frappier
Date de dépôt:	26 sept. 2013 13:30
Dernière modification:	08 déc. 2015 15:15
URI:	https://espace.inrs.ca/id/eprint/214

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