Impact des modificayions post-traductionnelles de type O-N-acetylglucosamine lors de l’apoptose des lymphocytes T.

Johnson, Bruno (2012). Impact des modificayions post-traductionnelles de type O-N-acetylglucosamine lors de l’apoptose des lymphocytes T. Mémoire. Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en sciences expérimentales de la santé, 102 p.

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Résumé

L'objectif principal de notre projet de recherche était de démontrer l'importance des modifications post-traductionnelles de type 0-N-acetylglucosamine (0-GicNAc) dans la régulation de l'apoptose des lymphocytes T. Les effets de ce type de glycosylation demeurent relativement peu étudiés, bien qu'il soit en compétition avec la phosphorylation pour la modification des résidus sérines et thréonines et pourrait affecter l'activation de diverses voies apoptotiques contrôlées par des sérines/thréonines kinases. Lors de 1'0-GicNAcylation, l'enzyme 0-N-acetylglucosamine transferase (OGT) catalyse l'ajout du monosaccharide 0-GicNAc, tandis que l'enzyme 0-N­ acetylglucosaminidase (OGA) catalyse le retrait de la modification. L'inhibition d'OGT avec l'inhibiteur 0-(2-acetamido-2-deoxy-D-glucopyranosylidene) amino-N­ phenylcarbamate (PUGNAc) diminuerait la fragmentation de l'ADN des thymocytes humains HPB-ALL suite à leur exposition au tributylétain (TBT), tel que démontré par l'analyse du cycle cellulaire en cytométrie de flux et par la visualisation de la fragmentation de l'ADN sur gel d'agarose. Une augmentation de 1'0-GicNAcylation a été observée suite à l'exposition des cellules au TBT. De plus, ce projet de recherche a permis de déterminer que le complexe de fragmentation de l'ADN (OFF) pouvait être régulé par 1'0-GicNAcylation. L'immunoprécipitation des protéines 0-GicNAcylées à l'aide de la forme succinylée de l'agglutinine du germe de blé (sWGA), suivi d'immunobuvardages de type Western ont permis de déterminer que 1'0-glycosylation du DFF45 protègerait la protéine de son clivage par la caspase-3 lors de l'apoptose. Le DFF45 est l'inhibiteur du DFF40, l'endonucléase majoritairement responsable de la fragmentation internucléosomale de l'ADN lors de l'apoptose. Les résultats de ce projet de recherche auront permis de démontrer pour la première fois l'implication de l'ajout d'O-GicNAc dans la régulation de l'apoptose nucléaire.

The principal objective of our research project was to demonstrate the importance of 0-N-acetylglucosamine (0-GicNAc) post-translational modifications on the regulation of apoptosis in T cells. The affects of 0-GicNAcylation are still relatively unknown, but could play a major role in different signalisation pathways because of its competition with phosphorylation on serine and threonine residues. The enzyme 0-N­ acetylglucosamine transferase (OGT) catalyses the addition of 0-GicNAc monosaccharide, while 0-N-acetylglucosaminidase (OGA) removes the modification. The inhibition of OGT with inhibitor 0-(2-acetamido-2-deoxy-0-glucopyranosylidene) amino-N-phenylcarbamate (PUGNAc) protected human T-lymphoblastics cells HPB-ALL exposed to tributyltin (TBT). The inhibition of apoptosis in cells exposed to PUGNAc was proven by analysis of the cell cycle by flow cytometry and visualization of DNA fragmentation on agarose gel. Western blats analysis showed an increase in 0- GicNAcylated proteins following TBT exposure. Also, this research project contributed to identify the DNA fragmentation factor complex (OFF) as being regulated by 0-GicNAc. lmmunoprecipitation of 0-GicNAcylated proteins with the succinylated form of wheat germ agglutinin (sWGA), followed by western blats showed that 0-GicNAc modification of DFF45 protected the protein form its cleavage by caspase-3 during apoptosis. DFF45 is the inhibitor of DFF40, the endonuclease majorly responsible of internucleosomal DNA fragmentation during apoptosis. Results from this research program revealed for the first time a role of 0-GicNAc modification in the regulation of nuclear apoptosis.

Type de document:	Thèse Mémoire
Directeur de mémoire/thèse:	Bernier, Jacques
Mots-clés libres:	-
Centre:	Centre INRS-Institut Armand Frappier
Date de dépôt:	28 juin 2024 19:19
Dernière modification:	28 juin 2024 19:19
URI:	https://espace.inrs.ca/id/eprint/2007

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