Isolation et caractérisation des vésicules extracellulaires périphériques et analyse in vitro et in vivo de leurs perméabilités à travers la barrière hématoencéphalique

Landri, Sarra (2020). Isolation et caractérisation des vésicules extracellulaires périphériques et analyse in vitro et in vivo de leurs perméabilités à travers la barrière hématoencéphalique Mémoire. Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en sciences expérimentales de la santé, 99 p.

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Résumé

Les vésicules extracellulaires (VEs) sont des nanovésicules libérées par divers types de cellules. Il existe 3 principaux types de VEs qui diffèrent par leurs tailles et leurs sites de biogenèse : les corps apoptotiques (1-10 μm), les microvésicules (0, 1-1 μm) et les exosomes (40-150 nm). Ces derniers sont capables de transporter une variété de molécules biologiques (lipides, ARNs et protéines) et jouent un rôle important dans la communication intercellulaire. Plusieurs études suggèrent que les VEs peuvent traverser la barrière hématoencéphalique (BHE). Cependant les évidences sont indirectes et les mécanismes responsables de ce transport sont encore inconnus. Nous émettons l'hypothèse que les VEs plasmatiques humaines issues de sujets sains sont capables de franchir la BHE de manière intacte et d'atteindre le système nerveux central. Les objectifs de l'étude sont d'isoler les VEs plasmatiques, les caractériser et d'analyser leurs perméabilités à travers la BH E sur un modèle in vitro et in vivo. Les caractérisations se déroulent en quatre étapes : soit la microscopie électronique pour la morphologie, les« Western blot » pour la présence de marqueurs vésiculaires et la technique de Nanoparticle Tracking Analysis (NTA) pour la détermination de leurs concentrations et de leur taille. Dans la deuxième partie, nous avons mis au point un protocole de marquage des VEs avec un fluorophore spécifique des bicouches phospholipidiques. L'efficacité du marquage a été vérifiée par microscopie confocale, Nanoparticle tracking Analysis et par cytométrie en flux. Un modèle de BHE in vitro basé sur les cellules vasculaires endothéliales murines bEnd.3 a été établi. Ce modèle nous a permis d'étudier l'internalisation des VEs fluorescentes et d'évaluer l'efficacité de leurs passages à travers cette barrière. Finalement, les VEs marquées ont été injectées dans la circulation de larves de Zebrafish afin d'évaluer leur biodistribution. En conclusion, on a révélé que les VEs, provenant de sujets sains, sont internalisées dans les cellules bEnd.3, qu'elles sont capables de franchir la monocouche de cellules endothéliales in vitro et passer du sang vers le cerveau dans un modèle in vivo.

Type de document:	Thèse Mémoire
Directeur de mémoire/thèse:	Ramassamy, Charles
Mots-clés libres:	vésicules extracellulaires (VEs); cellules endothéliales du cerveau de souris (bEnd.3); PKH67; barrière hématoencéphalique (BHE)
Centre:	Centre INRS-Institut Armand Frappier
Date de dépôt:	06 nov. 2024 14:59
Dernière modification:	06 nov. 2024 14:59
URI:	https://espace.inrs.ca/id/eprint/15903

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