Optimization of a 3d cell co-culture model and a bilayered cell co-culture model as biologically representative alternatives for mammary gland studies

Juarez Velazquez, Melany (2020). Optimization of a 3d cell co-culture model and a bilayered cell co-culture model as biologically representative alternatives for mammary gland studies Mémoire. Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en sciences expérimentales de la santé, 67 p.

Prévisualisation

PDF - Version publiée Télécharger (22MB) | Prévisualisation

Résumé

L'unité fonctionnelle de la glande mammaire est l'acinus bicouche, composé d'une couche interne de cellules épithéliales luminales polarisées et d'une couche externe de cellules myoépithéliales. Notre projet vise à développer un modèle in vitro représentatif des interactions entre les cellules luminales et myoépithéliales de la glande mammaire. Ceci est réalisé en établissant un modèle de co-culture bicouche 3D et un modèle de co-culture en couches utilisant les deux types de cellules. Nos résultats montrent que des cellules humaines MCF-12A luminales co-cultivées avec des cellulles myoépitheliales Myo1089 dans du Matrigel forment des acini bicouches. Ces modèles 3D miment de près la structure des acini bicouches observés in vivo. Dans le modèle en couche, les cellules MCF-12A et Myo1089 ont été co-cultivées chacune sur un côté différent de la membrane poreuse d'inserts pour créer un système de culture en couches. Nos résultats ont démontré que les cellules ensemencées de chaque côté de la membrane peuvent communiquer via des jonctions lacunaires, comme le montrent les tests de transfert de colorant utilisant la calcéine et le DiL. L'analyse par immunofluorescence suggère que des jonctions se forment entre les cellules luminales et myoépithéliales à l'intérieur des pores de la membrane. Les expériences futures viseront à évaluer l'impact de la communication bidirectionnelle sur la signalisation cellulaire dans chaque type de cellules. Nous espérons que nos modèles in vitro innovants fourniront des options plus pertinentes sur le plan biologique pour les études toxicologiques en imitant la structure, la communication et la composition de la glande mammaire.

The functional unit of the mammary gland is the bilayered acinus, composed of an inner layer of polarized luminal epithelial cells and an outer layer of myoepithelial cells. Our project aims to develop a representative in vitro model of the interactions between luminal and myoepithelial cells of the mammary gland. This is achieved by establishing a 3D bilayered co-culture model and a layered co-culture model using both types of cells. Our results showed that luminal MCF-12A and myoepithelial-like Myo1089 human cells co-cultured in Matrigel form bilayered acini. This 3D models closely mimic the structure of the bilayered acini observed in vivo.

In the second model, MCF-12A and Myo1089 cells were co-cultured on each side of the porous membranes of inserts to create a layered cultured system. Our results have demonstrated that cells seeded on each side of the membrane can communicate via gap junctions, as demonstrated by dye transfer assays using calcein and DiL. Immunofluorescence analysis suggested that junctions are formed between luminal and myoepithelial cells within the pores of the membrane. Future experiments will aim to evaluate the impact of bidirectional crosstalk on cell signaling in each cell type. We expect that our innovative in vitro models will provide a more biologically relevant options for toxicological studies by mimicking the structure, the communication and the composition of the mammary gland.

Type de document:	Thèse Mémoire
Directeur de mémoire/thèse:	Plante, Isabelle
Mots-clés libres:	Glande mammaire; co-culture; Matrigel; MCF-12A; Myo1089; acinus bicouche; culture cellulaire 3D, Vitrogel, jonctions; mammary gland; bilayered acinus; 3D cell culture; gap junctions
Centre:	Centre INRS-Institut Armand Frappier
Date de dépôt:	09 juill. 2024 15:25
Dernière modification:	09 juill. 2024 15:25
URI:	https://espace.inrs.ca/id/eprint/15825

Gestion Actions (Identification requise)

Modifier la notice