À la recherche de modulateurs allostériques de l’angiogénine

Pinoteau, Marie-Aude (2019). À la recherche de modulateurs allostériques de l’angiogénine Mémoire. Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en Microbiologie Appliquée, 61 p.

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Résumé

L’angiogénine (RNase 5) est une ribonucléase impliquée dans plusieurs pathologies telles que le cancer et la maladie de Parkinson. Or, des modulateurs allostériques pourraient offrir de nouvelles approches thérapeutiques et une approche basée sur le fragment-based drug design (FBDD) pourrait permettre d’obtenir de telles molécules. Ainsi, une librairie de 1640 fragments a été criblée par RMN et 4 ligands potentiels ont été identifiés. Des titrages RMN ont permis de confirmer la liaison et de déterminer que les sites de fixation sur la structure n’impliquaient probablement pas les résidus catalytiques. Ces 4 fragments n’ont pas engendré de modification de la stabilité thermique de la protéine, étudiée par thermal shift assay. De plus, la liaison de ces fragments n’a pas inhibé l’activité ribonucléolytique de la RNase 5 sur l’ARNt, tel que visualisé sur des gels de polyacrylamide/urée. Finalement, la portée de la présence des fragments sur la prolifération cellulaire engendrée par la RNase 5 a été évaluée sur deux lignées cellulaires : HeLa et SH-SY5Y. Les résultats ont démontré que deux des fragments semblent influencer la prolifération cellulaire.

Bref, ces résultats suggèrent que les fragments identifiés pourraient agir de manière allostérique et servir de base à la poursuite d’une approche FBDD.

Angiogenin (RNase 5) is a ribonuclease involved in several pathologies such as cancer and Parkinson's disease. Allosteric modulators of this protein could offer new therapeutic approaches and a fragment-based drug design (FBDD) approach could make it possible to obtain such molecules. Thus, a library of 1640 fragments was screened by NMR and 4 potential ligands were identified. NMR titrations confirmed the binding and determined that binding sites probably did not involve catalytic residues. These 4 fragments did not generate any modification of the thermal stability of the protein, studied by thermal shift assay. In addition, binding of these fragments did not inhibit RNase 5 ribonucleolytic activity on tRNA, as visualized on polyacrylamide / urea gels. Finally, the effect of the presence of fragments on cell proliferation generated by RNase 5 was evaluated on two cell lines: HeLa and SH-SY5Y. Results demonstrated that two of the fragments appear to influence cell proliferation.

Overall, these results suggest that the identified fragments could act in an allosteric manner and serve as lead compounds for pursuing a FBDD approach.

Type de document:	Thèse Mémoire
Directeur de mémoire/thèse:	Doucet, Nicolas
Co-directeurs de mémoire/thèse:	Laplante, Steven
Mots-clés libres:	RMN; RNase5; allostérie; protéines; modulation; allosteric; protein
Centre:	Centre INRS-Institut Armand Frappier
Date de dépôt:	09 juill. 2024 15:29
Dernière modification:	09 juill. 2024 15:29
URI:	https://espace.inrs.ca/id/eprint/15818

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