Reticulon-3 Modulates the Incorporation of Replication Competent Hepatitis C Virus Molecules for Release Via Exosomes

Li, Jingjing (2020). Reticulon-3 Modulates the Incorporation of Replication Competent Hepatitis C Virus Molecules for Release Via Exosomes Mémoire. Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en virologie et immunologie, 72 p.

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Résumé

Nombreuses études soutiennent l'importance des voies exosomales dans l'établissement de la persistance virale chez l'hôte. Cependant, les principaux régulateurs et mécanismes moléculaires par lesquels les virus interviennent dans la composition et la libération des exosomes restent inconnus. Dans notre étude, nous avons observé une augmentation significative de l'expression des isoformes courtes et longues de Reticulon-3 (RTN3S&L), une protéine résidente du réticulum endoplasmique (ER), était associée à une infection chronique par le Virus de l’Hépatite C (VHC) sur les cellules Huh7. Ainsi, la microscopie confocale et l'analyse RNA-ChIP ont révélé que RTN3S&L co-localisaient et interagissaient avec l'ARN viral et NS3. En plus, le knockdown du RTN3 dans les cellules au réplicon de pleine longueur du VHC était associé à une réduction significative de la sécrétion des exosomes independamment de la réplication virale. De plus, des exosomes sécrétés par les cellulles au réplicon de pleine longueur du VHC étaient moins infectieux lorsqu’ils étaient co-cultivés avec les cellules naïves. De manière remarquable, l'expression de RTN3L n'a augmenté que lorsque le mutant en c-terminal de RTN3S a été surexprimé, suggérant une surexpression compensatoire possible de RTN3L avec ce mutant. Finalement, le sofosbuvir, un inhibiteur du NS5B du VHC, peut significativement réduire l'expression de RTN3L&S induite par le VHC et atténuer la libération des exosomes infectieux. En conclusion, nos résultats suggèrent que RTN3 pourrait être un nouveau régulateur spécifique de la composition et de la libération des exosomes au moins dans l'infection par le VHC.

Evidence supports the importance of exosomal pathways in the establishment of viral persistence in the host. However, little is known about the key regulators and molecular mechanisms through which viruses mediate the selective sorting of viral and host molecules for loading and release via exosomes. In our study, we observed by western blotting analysis a significantly increased expression of both short and long isoforms of Reticulon-3 (RTN3S&L), an endoplasmic reticulum (ER) resident protein, during chronic Hepatitis C virus (HCV) infection of Huh7 cells. Confocal microscopy and RNA-ChIP analysis revealed that RTN3S&L co-localized and interacted with dsHCV RNA and HCV NS3. Subsequently, we revealed that RTN3 knockdown in HCV full-length (FL) replicon cells were associated with a reduction in the release of infectious exosome independent of viral replication. Further, exosomes from RTN3 knockdown HCV FL replicon cells were less infectious when co-cultured with naïve. Strikingly, RTN3L expression only increased when C-terminal deleted RTN3S mutant was overexpressed, suggests a possible compensatory overexpression of RTN3L with the c-terminal deletion of RTN3S. Moreover, we found that Sofosbuvir, an HCV NS4B inhibitor, could significantly reduce HCV induced RTN3L&S expression and also attenuated cell released infectious exosomes. Taken together, our results suggest that RTN3 might be a novel specific regulator of exosome loadings and release at least in HCV infection.

Type de document:	Thèse Mémoire
Directeur de mémoire/thèse:	Bukong, Terence
Mots-clés libres:	Exosomes; VHC; RTN3; Réticulum endoplasmique; HCV; Endoplasmic Reticulum
Centre:	Centre INRS-Institut Armand Frappier
Date de dépôt:	01 juill. 2024 13:59
Dernière modification:	01 juill. 2024 13:59
URI:	https://espace.inrs.ca/id/eprint/15786

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