Mécanismes moléculaires impliqués dans la résistance des cellules déficientes en DFF40 lors de l’apoptose induite par la cycloheximide

Paimboeuf, Adeline (2021). Mécanismes moléculaires impliqués dans la résistance des cellules déficientes en DFF40 lors de l’apoptose induite par la cycloheximide Mémoire. Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en sciences expérimentales de la santé, 112 p.

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Résumé

La voie de l'apoptose est un mécanisme de mort cellulaire programmée qui est crucial pour l'homéostasie cellulaire et tissulaire, mais aussi dans le développement des organes. Elle implique trois grandes voies dépendantes des caspases, qui conduisent finalement à la fragmentation de l'ADN. On sait que les cellules cancéreuses régulent fortement la voie apoptotique et son rôle dans l'acquisition des caractéristiques du cancer a été discuté au cours des dernières décennies. De nombreuses mutations dans les types de cellules cancéreuses ont été rapportées comme étant impliquées dans la chimiorésistance et les résultats des traitements. Dont la sous expression du facteur de fragmentation de l’ADN (DFF40) qui serait lié à la chimiorésistance. Ainsi, nous avons voulu connaître les mécanismes intervenant dans cette résistance face à l’induction de l’apoptose par la cycloheximide (CHX). Notre hypothèse est que les cellules cancéreuses seraient résistantes à l’apoptose induite par la CHX due à une déficience en DFF40.

Sachant cela, nous voulons mieux comprendre la résistance induite par une déficience en DFF40 par la voie dépendante de la caspase 8 et donc la voie extrinsèque. Pour cela, nous avons réalisé des traitements avec des temps de 4, 8, 12, 16, 24, 48 H et des concentrations de 1, 10, 25, 50 μM à la cycloheximide sur deux lignées cellulaires Jurkats et HeLa : DFF40 KO et DFF40 WT. Puis nous avons utilisé le cytomètre en flux afin d’analyser la viabilité cellulaire, le cycle cellulaire, le taux d’apoptose (Annexine V/Pi), et l’activité de Caspase 3/7. De plus, nous avons confirmé l’absence ou non de fragmentation par gel d’agarose. Nos résultats ont montré de plus faible mortalité avec les traitements à la cycloheximide dans la lignée DFF40 KO, tout comme un taux d’apoptose plus faible dans cette lignée. De plus, nous avons confirmé l’absence de fragmentation dans la lignée DFF40 avec des gels d’agarose et avec de faibles taux de cellules en phase SubG0/G1. Cependant, nous observons plus d’activité de la Caspase 3/7 dans la lignée DFF40. Nos travaux semblent donc confirmer que l’absence de DFF40 dans les cellules Jurkat entraînerait une résistance à l’induction de l’apoptose par la cycloheximide.

The apoptosis pathway is a programmed cell death mechanism that is crucial for cell and tissue homeostasis but also in organ development. It involves three major caspase-dependent pathways, which ultimately lead to DNA fragmentation. It is known that cancer cells strongly regulate the apoptotic pathway and its role in the acquisition of cancer characteristics has been discussed over the last decades. Many mutations in cancer cell types have been reported to be involved in chemoresistance and treatment outcomes. One of them is the under expression of DNA fragmentation factor (DFF40) which is thought to be related to chemoresistance. Thus, we wanted to know the mechanisms involved in this resistance to the induction of apoptosis by cycloheximide. Our hypothesis is that cancer cells would be resistant to CHX-induced apoptosis due to a deficiency in DFF40.

Knowing this, we want to better understand the resistance induced by DFF40 deficiency through the caspase 8 dependent pathway and thus the extrinsic pathway. For this purpose, we performed treatments with 4, 8, 12, 16, 24, 48 H and 1, 10, 25, 50 μM concentrations of cycloheximide on two Jurkats and HeLa cell lines: DFF40 KO and DFF40 WT. Then we used flow cytometer to analyze cell viability, cell cycle, apoptosis rate (Annexin V/Pi), and Caspase 3/7 activity. In addition, we confirmed the absence or absence of fragmentation by agarose gel. Our results showed lower mortality with cycloheximide treatments in the DFF40 KO line, as well as a lower rate of apoptosis in this line. Furthermore, we confirmed the absence of fragmentation in the DFF40 line with agarose gels and with low rates of SubG0/G1 phase cells. However, we observe more Caspase 3/7 activity in the DFF40 line. Our work thus seems to confirm that the absence of DFF40 in Jurkat cells would lead to resistance to cycloheximide induction of apoptosis.

Type de document:	Thèse Mémoire
Directeur de mémoire/thèse:	Bernier, Jacques
Mots-clés libres:	Apotose ; DFF40 ; Cycloheximide ; Résistance; Apoptosis
Centre:	Centre INRS-Institut Armand Frappier
Date de dépôt:	02 juill. 2024 13:57
Dernière modification:	02 juill. 2024 13:57
URI:	https://espace.inrs.ca/id/eprint/15748

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