Réévaluation des substrats de la métalloprotéase gp63 du parasite leishmania

Guay-Vincent, Marie-Michèle (2021). Réévaluation des substrats de la métalloprotéase gp63 du parasite leishmania Mémoire. Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en Microbiologie Appliquée, 53 p.

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Résumé

L'interaction initiale entre le parasite Leishmania et la cellule cible est médiée par des molécules de surface, dont la métalloprotéase GP63, qui influence la physiologie du macrophage infecté en clivant plusieurs protéines. Plusieurs de ces substrats ont auparavant été identifiés par différentes équipes de chercheurs. Cependant, ces recherches ne mentionnent pas l'utilisation d'un inhibiteur spécifique aux métalloprotéases lors de l'extraction des protéines. Après la lyse, elle peut alors effectuer des clivages sur des protéines qui n'auraient pas été en contact avec celle-ci dans une cellule intacte. Des tests par Western Blot ont donc été effectués en comparant les profils protéiques provenant de macrophages infectés par Leishmania et en ajoutant ou non dans le tampon de lyse un inhibiteur de métalloprotéase, la 1,10-Phénantroline. Cet inhibiteur chélate les ions de zinc et empêche donc toute action de clivage par le site actif. Selon les résultats obtenus, seulement 3 parmi les 10 substrats étudiés sont des substrats avérés de GP63. Ces résultats mènent à un questionnement quant au(x) rôle(s) proposé(s) de GP63 lors de l’infection et le besoin de le(s) rectifier.

The initial interaction between the Leishmania parasite and the target cell is mediated by surface molecules, including the metalloprotease GP63, which influences the physiology of the infected macrophage by cleaving several proteins. These substrates have previously been identified by different teams of researchers. However, those researches do not mention the use of a specific metalloprotease inhibitor during protein extraction. After lysis, GP63 could still cleave some proteins that would not have been in contact with in an intact cell. Western blot tests were therefore made to compare the profiles of the extracted proteins from macrophages infected with Leishmania and by adding or not to the lysis buffer a metalloprotease inhibitor, 1,10-Phenantroline. This inhibitor chelates zinc ions and therefore prevents any cleavage action by the active site. According to the results obtained, only 3 among the 10 substrates studied are true substrates of GP63. These results lead to questioning as to the proposed role(s) of GP63 during infection but also highlight the need to re-evaluate the other published substrates.

Type de document:	Thèse Mémoire
Directeur de mémoire/thèse:	Descoteaux, Albert
Mots-clés libres:	Leishmania ; GP63 ; leishmanolysin ; metalloprotease ; 1,10-phénanthroline ; facteur de virulence; 1,10-phenanthroline ; virulence factor
Centre:	Centre INRS-Institut Armand Frappier
Date de dépôt:	01 juill. 2024 13:55
Dernière modification:	01 juill. 2024 13:55
URI:	https://espace.inrs.ca/id/eprint/15706

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