Zalce Olivera, Maria Eugenia
(1993).
Expression du gène de la xylanase de Cryptococcus albtdus chez la levure Pichia stipitis
Mémoire.
Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maitrise en microbiologie appliquée, 97 p.
Résumé
A 1 'heure actuelle, il existe un grand intérêt pour la recherche de nouvelles sources
d'énergie qui, contrairement au pétrole, seraient moins polluantes, peu coûteuses et si possible
renouvelables. La biomasse, constituée principalement de polysaccharides, pourrait s'avérer une
solution, à condition de pouvoir dégrader efficacement ces polymères en monosaccharides plus
facilement utilisables. Le sujet de ce travail porte sur la bioconversion du xylane, un constituant
de l'hémicellulose, en éthanol. De nombreux microoorganismes sont capables de dégrader la
biomasse et de 1 'utiliser comme source de carbone pour leur croissance, mais ils ne produisent
pas d'éthanol. D'autre part, certaines levures, dont Pichia stipitis, fermentent les
monosaccharides en éthanol, mais elles ne possèdent pas les enzymes qui permettent la
dégradation des polysaccharides. Nous avons donc tenté de relier ces deux caractéristiques en
créant, par génie génétique, une levure capable de fermenter directement le xylane en éthanol
en clonant chez P. stipitis le gène de la xylanase de Cryptococcus albidus. Le gène de la
xylanase produit par cette levure a été isolé à partir d'une banque génomique et un fragment
d'environ 3 Kb a été séquencé (Boucher~ al., 1988; Morosoli et al., 1988b). La séquence a
montré que le gène contient 7 introns. Le gène de la xylanase sous forme de cADN a été placé
sous le contrôle du promoteur du gène de la xylose réductase de P. stipitis et a été cloné dans
cette souche. Le gène est exprimé et une xylanase de 50 kDa est sécrétée par le transformant
dans le milieu de culture. Cette souche IAF 145 est capable de croître dans un milieu xylane,
en conditions aérobiques mais sans pour cela produire de l'éthanol. En conditions anaérobiques,
ce clone fermente le xylane et produit jusqu'à 30 mM d'éthanol.
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