La régulation de la production des rhamnolipides chez Burkholderia Thailandensis.

Humery, Adeline (2013). La régulation de la production des rhamnolipides chez Burkholderia Thailandensis. Mémoire. Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en microbiologie appliquée, 190 p.

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Résumé

Les rhamnolipides sont des molécules amphiphiles possédant d'excellentes propriétés tensio­ actives. Ils ont été exhaustivement étudiés chez Pseudomonas aerugi nosa dû à leurs rôles dans les comportements multicellulaires de cette bactérie et à leur potentiel commercial comme surfactants alternatifs. Des gènes orthologues à rh/A, rh/B et rh/C, qui sont responsables de la production de rhamnolipides chez P. aeruginosa, ont été découverts chez Burkholderia thailandensis. Cette bactérie, contrairement à P. aeruginosa, contient les trois gènes au sein d'un même opéron qui existe en deux copies paralogues et fonctionnelles (quoiqu'une copie semble contribuer davantage à la production totale de rhamnolipides). L'objectif de ce projet est d'investiguer les facteurs régulant la transcription des opérons rh/ chez B. thailandensis. Puisque la communication intercellulaire (quorum sensing ou QS) est connue pour activer la production des rhamnolipides chez P. aeruginosa, l'hypothèse qu'un tel système opère aussi chez B. thailandensis a été explorée en testant différents mutants du QS pour leur production de rhamnolipides (caractérisés et quantifiés par LC/MS). Curieusement, il semblerait que la communication cellulaire chez B. thailandensis réprime la production de rhamnolip1des car certains mutants réussissent à en produire jusqu'à dix fois plus que la souche sauvage. Cependant,la régulation par le QS ne semble pas uniquement directe. Grâce à la construction de différents rapporteurs transcriptionnels de type fusion-/acZ transférés dans la souche sauvage et dans certains mutants intéressants du QS, la régulation de chaque opéron à partir des promoteurs rh/A1 et rhiA2 a été étudiée ainsi que leur implication respective dans la production totale de rhamnolipides. Les résultats confirment que l'un des opérons est davantage exprimé et davantage sensible au QS. Afin d'identifier le(s) régulateur{s) direct(s), deux axes de recherche ont été investigués : (1) par mutagénèse aléatoire de ces souches avec rapporteurs via un transposon suivi du criblage de mutants, (2) en étudiant (bioinformatique et technique du 5'RACE) et en utilisant les régions promotrices pour piéger les éventuelles molécules régulatrices. Les résultats de ce deuxième axe de recherche semblent conforter l'importance du QS dans la régulation des opérons, mais sous-entendent une interaction directe avec les régions promotrices. En parallèle,les différentes cinétiques effectuées ont souligné une corrélation entre la croissance et le niveau de production des rhamnolipides suggérant un coût énergétique important pour leur synthèse chez B. thailandensis.

Type de document:	Thèse Mémoire
Directeur de mémoire/thèse:	Déziel, Éric
Mots-clés libres:	surfactant ; quorum ; sensing
Centre:	Centre INRS-Institut Armand Frappier
Date de dépôt:	07 août 2018 13:56
Dernière modification:	07 août 2018 13:56
URI:	http://espace.inrs.ca/id/eprint/2378

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