Identification et caractérisation de la protéine codée par le gène NS2 de corona virus humain de souche OC43

Labonté, Patrick (1995). Identification et caractérisation de la protéine codée par le gène NS2 de corona virus humain de souche OC43 Mémoire. Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en virologie et immunologie, 166 p.

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Résumé

L'analyse et la comparaison des génomes du corona virus respiratoire humain HCV-OC43 et du coronavirus entérique bovin BCV démontrent clairement que ces deux virus sont très proches du point de vue phylogénétique. En effet toutes les séquences connues codant pour les protéines structurales de ces deux virus ont plus de 91% d'identité entre elles. Pourtant, HCV-OC43 et BCV infectent des hôtes et des organes différents mais se cultivent in vitro sur la même lignée cellulaire. Afin de compléter la caractérisation du génome du HCV-OC43 (à l'exception de l'ARNm 1 codant pour la polymérase d'ARN) et de comparer celle-ci avec celle de BCV, nous avons analysé le gène et le produit de ce gène se trouvant en S'de l'ARNm 2. À l'aide d'amorces spécifiques, nous avons amplifié par RT-PCR la région en 5' du gène de la HE de l'ARNm 2. Nous avons démontré que cette région contient un ORF codant pour une protéine putative de 278 acides aminés avec une masse moléculaire de 32.2 kDa. L'analyse informatisée de la séquence en acides aminés de cette protéine putavive ns2 a permis d'identifier six sites potentiels de phosphorylation et aucun site de N-glycosylation. La comparaison de la protéine putative ns2 de HCV-OC43 avec la séquence de la protéine ns2 des autres coronavirus a permis de constater que la séquence de cette protéine est hautement conservée. En effet, on observe 92% d'identité entre la protéine ns2 de BCV et de HCV-OC43, et environ 50% entre les protéines ns2 de ces deux virus (BCV et HCVOC43) et celles d'autres coronavirus (MHV-JI-Thf et MHV-A59). Suite à l'expression de la protéine ns2 du HCV-OC43 dans le vecteur d'expression procaryotique pMAL1M-c2, nous avons produit chez le lapin un antisérum spécifique à cette protéine. Par immunofluorescenoe, nous avons montré l'expression de la protéine ns2 du HCV-OC43 dans les cellules HR.T-18 infectées par HCV-OC43. Finalement, par immunobuvardage, nous avons montré que la protéine ns2 est probablement une protéine non-structurale car nous avons montré qu'elle est absente de préparations de virus HCV-OC43 purifiés.

Type de document:	Thèse Mémoire
Directeur de mémoire/thèse:	Talbot, Pierre
Co-directeurs de mémoire/thèse:	Mounir, Samir
Mots-clés libres:	-
Centre:	Centre INRS-Institut Armand Frappier
Date de dépôt:	08 sept. 2018 21:53
Dernière modification:	19 mai 2023 18:49
URI:	https://espace.inrs.ca/id/eprint/7558

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