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Clonage et Séquençage du gène secY de Streptomyces lividans 1326

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Ostiguy, Stéphane (1995). Clonage et Séquençage du gène secY de Streptomyces lividans 1326 Mémoire. Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en microbiologie appliquée, 141 p.

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Résumé

Afin de mieux comprendre et pour éventuellement améliorer le système de sécrétion de la bactérie Gram-positive Streptomyces lividans 66, le gène secY, codant pour la protéine SecY impliquée directement dans la sécrétion des protéines, a été cloné. Pour ce faire, une partie du gène a d'abord été amplifiée par la méthode du PCR. Le produit de PCR obtenu (600 pb) a ensuite été utilisé comme sonde pour cloner le gène complet. Une partie d'un fragment Bglii de 3.8 kb contenant le gène secY a été séquencé. La séquence en ADN a démontré que le gène secY s'étend sur 1311 paires de base et qu'il est encadré par le gène L15 en amont et le gène adk en aval.

Le gène ne possède pas de promoteur et semble faire partie d'un opéron avec les gènes adjacents. La protéine SecY présente 10 segments transmembranaires potentiels et sa séquence déduite en acides aminés démontre une bonne homologie avec les SecY de, entre autres, Brevibacterium flavum, Escherichia coli et Bacillus subtilis.

Le gène secY de s. lividans (secY5L) a été surexprimé chez E. coli R0112 afin de vérifier s'il pouvait complémenter la mutation secY24 de cette souche. La mutation secY24 abolit la sécrétion des protéines et la croissance de la bactérie à 42°C. La surexpression de secY5L n'a pas permis de rétablir la croissance de la souche R0112 à 42°C et a également nui à la croissance de la souche témoin DHllS (secY+) à 30°C et 42°C. Ces résultats ne permettent donc pas de déterminer s'il y a complémentation ou non.

Type de document: Thèse Mémoire
Directeur de mémoire/thèse: Morosoli, Rolf
Mots-clés libres: -
Centre: Centre INRS-Institut Armand Frappier
Date de dépôt: 08 sept. 2018 21:56
Dernière modification: 08 sept. 2018 21:56
URI: http://espace.inrs.ca/id/eprint/7547

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