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Étude biochimique de la nosynthaseneuronaledechatetderat.

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Côté, Jean-François (1996). Étude biochimique de la nosynthaseneuronaledechatetderat. Mémoire. Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en sciences expérimentales de la santé, 112 p.

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Résumé

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Des cellules et des tissus tels que les cellules endothéliales, les neutrophiles, les neurones et les surrénales ont la capacité d'oxyder la L-arginine en engendrant la formation d'oxyde nitrique (NO) et de citrulline, conune produits. Une telle conversion est générée par la NO synthase (NOS), une enzyme cytoplasnüque. Le NO ainsi produit est un messager cellulaire agissant comme activateur de la guanylyl cyclase.

L'objectif des présents travaux est d'étudier biochimiquement la NOS neuronale de chat en s'attardant à : 1) l'effet des cofacteurs (calcium, calmoduline, FAD et tétrahydrobioptérine) sur l'activité enzymatique, 2) la détermination des paramètres cinétiques pour le substrat arginine et 3) la détermination de la constante d'inhibition d'inhibiteurs de la NOS. Un autre objectif est d'étudier la distribution régionale de l'activité spécifique de la NOS dans onze structures neuroanatomiques du cerveau de chat. Les mêmes études seront effectuées dans le cerveau de rat avec le but de faire un comparaison interespèces de la même enzyme. Un dernier objectif est de faire une caractérisation préliminaire du fonctionnement de la NOS des glandes surrénales et du foie. L'activité de la NOS est déterminée en mesurant la formation de [3H] citrulline à partir de [3H]-arginine dans un milieu d'incubation conte~t une NOS semi-purifiée.

Les travaux montrent que dans le cerveau de chat ainsi que dans celui de rat, l'activité de la NOS neuronale est : 1) dépendante de la présence de NADPH, 2) dépendante du tandem calcium/calmoduline, 3) significativement activée par un ajout de FAD et de tétrahydrobioptérine (chez le chat, le V-. passe de 59.4 à 118 pmol de citrullin/mg prot/min et chez le rat il passe de 149 à 185 pmol de citrulline/mg prot/min), 4) présente à différents niveaux dans les onze structures du cerveau de chat et les cinq structures du cerveau de rat étudiées montrant que la NOS est largement distribuée dans le système nerveux de ces deux espèces. De plus, le Km pour l'arginine chez le chat est de 11 uM en présence de FAD et de tétrahydrobioptérine et de 41 uM lorsque ces cofacteurs ne sont pas ajoutés. Ces résultats montrent qu'en présence de FAD et de tétrahydrobioptérine dans le milieu d'incubation, les interactions enzyme-substrat sont stabilisées. Des résultats allant dans la même direction ont été obtenus chez le rat (un Km de 4.8 uM en présence de FAD et tétrahydrobioptérine et de 19.3 uM lorsque les cofacteurs ne sont pas ajoutés).

Les présents travaux montrent aussi que l'activité de la NOS des surrénales est : dépendante du tandem calciurnlcalmoduline, dépendante de la présence de NAD PH, activée par la présence de FAD et de tétrahydrobioptérine et réduite par des inhibiteurs compétitifs de la NOS. La cinétique de l'enzyme face à l'arginine a révélé un v_ de 84 pmol de citrulline formée/mg prot/min et un Km de 28 J1M. Ces résultats montrent des propriétés de la NOS surrénalienne très ·similaires à la NOS neuronale. Finalement, le foie de rat ne démontre aucune activité constitutive de NOS.

Type de document: Thèse Mémoire
Directeur de mémoire/thèse: Roberge, André G.
Co-directeurs de mémoire/thèse: Charbonneau, Michel
Mots-clés libres: -
Centre: Centre INRS-Institut Armand Frappier
Date de dépôt: 30 avr. 2018 01:01
Dernière modification: 30 avr. 2018 01:01
URI: http://espace.inrs.ca/id/eprint/6664

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