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L'enzyme de conversion de l'endothéllne humaine : production , chez les cellules mammlferes de type COS-7

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Lampron, Philipe; Létourneau, M; Fournier, Alain . L'enzyme de conversion de l'endothéllne humaine : production , chez les cellules mammlferes de type COS-7 In: 3e édition, Congrès INRS-Institut Armand Frappier 2003, 6-8 novembre 2003, Stoneham.

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Résumé

Objectif: L' endothéline est un acteur important impliqué dans plusieurs anomalies cardiovasculaires tels l'hypertension artérielle et l'infarctus. Ce peptide composé de 21 acides aminés est identifié comme un des plus puissants vasoconstricteurs connus. Sa production est assurée par une enzyme de conversion, l'ECE, présente à la surface des cellules endothéliales. ; Celle-ci clive le précurseur, la Big-endothéline (BigET) en endothéline et ce, entre les acides aminés valine/isoleucine 22 et tryptophane 21. Notre objectif a été de produire l'enzyme en quantité importante et ce, à partir des méthodes de clonage moléculaire et de transfection chez les cellules mammifères de type COS- 7. Méthodes: La construction d'un vecteur plasmidique porteur de l'ADNc de la portion extracellulaire de l' enzyme fusionné avec le peptide signal de la phosphatase alcaline (pCI- neohECE-1 sol) a été transfecté dans les cellules COS- 7 permettant son expression stable sous une forme soluble. Les cellules mutantes ont été subséquemment cultivées et sélectionnées en fonction de leur capacité de synthèse de l' enzyme de conversion retrouvée dans le surnageant. Résultats: Un test ELISA des fractions purifiées par chromatographie a permis de révéler la présence de l'enzyme grâce à l'utilisation d'un anticorps polyclonal dirigé contre cette dernière. La technique de Western blot a permis également de confirmer la production de l'enzyme après visualisation d'une bande aux environs de 120 kDa, soit le poids moléculaire de la forme monomérique de l'ECE. Conclusion: L' activité de cette enzyme recombinante a été vérifiée en rapport avec la forme membranaire retrouvée chez l'humain la rendant ainsi un outil intéressant pour l'étude de la spécificité de son clivage. Différents essais sont en cours pour déterminer les résidus clés du substrat permettant un clivage spécifique par l'enzyme et ce, grâce à l'utilisation d'analogues de la BigET .

Type de document: Document issu d'une conférence ou d'un atelier
Informations complémentaires: Affiche scientifique
Mots-clés libres: -
Centre: Centre INRS-Institut Armand Frappier
Date de dépôt: 04 avr. 2018 15:06
Dernière modification: 04 avr. 2018 15:06
URI: http://espace.inrs.ca/id/eprint/5993

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