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Découverte de séquences peptidiques liant l'endothéline-1 et inhibant son action.

Frappier, Josée (2007). Découverte de séquences peptidiques liant l'endothéline-1 et inhibant son action. Mémoire. Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en sciences expérimentales de la santé, 71 p.

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Résumé

Suite à sa découverte en 1988 par Yanagisawa, l'endothél i ne-1 (ET-1) a été rapidement considérée comme l'un des agents vasoconstricteurs les plus puissants et comme un facteur important de l'hypertension. La recherche universitaire et l'industrie pharmaceutique ont donc amorcé prioritairement des travaux afin de mettre au point des antagonistes des récepteurs de l'ET. L'objectifvisé par cette étude est de développer une nouvelle approche pharmacologique par la découverte de peptides liant 1'ET-1 et inhibant son action. Pour ce faire, la technique de criblage de banque de phages (CBP) a été utilisée. Cette stratégie permet de sélectionner les peptides ayant une affinité significative pour une cible à l'aide d'une librairie de phages exprimant de 106 à 109 peptides distincts. Une expérience de CBP effectuée précédemment au laboratoire avait permis d'obtenir une séquence consensus. Par conséquent, les travaux présentés débutent par la construction d'une première librairie peptidique. L'affinité de celle-ci pour l'ET-1 est statistiquement supérieure à celle d'un peptide utilisé comme contrôle négatif. Ces résultats ont mené à la synthèse d'une librairie de phages partiellement aléatoire dont le titre était de 1,6 x 105 clones. Cette librairie de phages a été construite selon le système T7Select 10-3b de Novagen puis a été exposée à l'ET-1 afin de sélectionner les clones exprimant les peptides ayant le plus d'affinité pour l'ET-1. Suite aux tours de sélection, 21 clones ont été séquencés. L'étape suivante a été de synthétiser une librairie de peptides correspondant aux séquences trouvées et de tester leur affinité relative. L'affinité des peptides de cette dernière librairie peptidique s'est avérée être similaire ou supérieure au meilleur peptide de la première librairie peptidique. De plus, deux peptides ont été testés quant à leur potentiel d'inhibition de la vasoconstriction de 1'ET-1 sur des aortes de rat et ils ont été capables de provoquer une augmentation de l'EC50 de l'ET-1,donc de réduire l'activité du peptide. En plus de conduire à l'identification de deux peptides liant l'ET-1 et inhibant son action vasoconstrictrice, la comparaison des séquences obtenues avec le protéome humain a permis de trouver des séquences analogues dans des protéines se liant à l'ADN, dans des protéines dont 1'action est reliée à l'ADP/ATP ainsi que dans des protéases à sérine. La famille des protéases à sérine dont notamment l'hepsine et la chymase offre un intérêt particulier. L'hepsine est impliquée dans la coagulation. Elle possède Il acides aminés correspondant à une des séquences de notre banque. Également,l'ET-1 est connue pour interagir avec différentes protéases à sérine comme par exemple la chymase qui possède la capacité de cliver la Big ET-1 en ET-1(1-31) de même que la thrombine qui est impliquée dans le processus de la coagulation.

Type de document: Mémoire
Directeur de mémoire/thèse: Fournier, Alain
Mots-clés libres: criblage ; phage ; peptide
Centre: Centre INRS-Institut Armand Frappier
Date de dépôt: 11 févr. 2013 19:15
Dernière modification: 14 déc. 2015 19:51
URI: http://espace.inrs.ca/id/eprint/515

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