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Complexe multiprotéique formé autour de la VPg-Pro du virus de la mosaïque du navet (TuMV)

Viel, Catherine (2005). Complexe multiprotéique formé autour de la VPg-Pro du virus de la mosaïque du navet (TuMV) Mémoire. Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en virologie et immunologie, 161 p.

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Résumé

Le virus de la mosaïque du navet (TuMV), faisant partie du genre Potyvirus, est le plus important des virus affectant la culture des Brassicaceae telles que le colza et les choux. Il est également le second en importance pour les pertes causées aux cultures par les maladies virales (Tomlinson, 1987). L'ARN viral de polarité positive du TuMV code pour une polyprotéine initiale de haut poids moléculaire qui est clivée par l'intermédiaire de trois protéases virales. La forme précurseure VPg-Pro est une de ces protéases qui, par autoprotéolyse, permet la libération de la protéine mature VPg. Cette protéase est également retrouvée sous la forme précurseure 6K2-VPg-Pro (Ménard et al., 1995). La forme mature VPg est liée à l'extrémité 5' de l'ARN génomique du TuMV. Il a été démontré que cette protéine pouvait également se lier à un facteur clé de l'initiation de la traduction des eucaryotes, le facteur eiF-4E (Wittmann et al., 1997). Lors de l'initiation de la traduction, le facteur eiF-4E s'associe à la structure coiffe m7GpppN des ARNm cellulaires et favorise le recrutement du complexe ribosomale 43S (Gingras et al., 1999). L'interaction entre les protéines eiF(iso)4E et VPg est essentielle au succès de l'infection du TuMV chez B. perviridis (Léonard et al., 2000). Sachant l'importance de cette interaction chez le TuMV, la présente recherche souhaitait mieux comprendre l'importance de la protéine VPg chez ce virus. Plus précisément, elle avait pour but de vérifier l'hypothèse selon laquelle la protéine VPg-Pro du TuMV pourrait servir de point d'ancrage à un complexe de protéines cellulaires et virales qui permettraient la traduction et la réplication selon une conformation circulaire de l'ARN viral. Comme le facteur eiF(iso)4E est essentiel au succès de l 'infection du TuMV. Son patron d'expression a d'abord été étudié. Chez les végétaux, au moins deux isomères du facteur eiF4E ont été identifiés, c'est-à-dire les isomères eiF4E et eiF(iso)4E (Browning,1996). Le facteur eiF(iso)4E a été détecté au niveau des plantes saines et infectées par le TuMV tandis que le facteur eiF4E a été détecté uniquement chez les plantes infectées. Ce résultat laisse entrevoir une fonction spécifique à chacun des isomères. Une seconde série d'expérimentations a été réalisée afin de séparer les membranes cellulaires de feuilles de B. perviridis saines ou infectées au TuMV sur gradient de sucrose. L'analyse des fractions récoltées a montré une co-localisation des formes précurseures 6K2-YPg-Pro et VPg-Pro avec le reticulum endoplasmique, les protéines cellulaires eiF4E/eiF(iso)4E et eiF(iso)4G et PABP2, des protéines impliquées dans l'initiation de la traduction des ARNm cellulaires, ainsi qu'avec la polymérase virale RdRp. Les formes précurseures 6K2-VPg-Pro et VPg-Pro ont ensuite été purifiées in planta par chromatographie d'affinité au nickel à partir des fractions membranaires issues d"un !:,7fadient de sucrose. Les isomères eiF4E, la protéine PABP2 et les protéines virales RdRp et CI ont été co-purifiées in planta avec les formes 6K2-VPg-Pro et VPg-Pro. Les résultats de la présente étude suggèrent l'existence d'un complexe multiprotéiques formé autour des formes précurseures 6K2-YPg-Pro et VPg-Pro. D'autres résultats obtenus en laboratoire et chez divers Potyvirus laissent présager que les formes précurseures de VPg pourraient servir de point d'ancrage afin de recruter les protéines nécessaires à la réplication et la traduction du virus. Ces deux processus seraient possiblement effectués selon une confonnation circulaire de l'ARN viral possiblement par !"intermédiaire de l"un ou l'autre des complexes suivants: 6K2-VPg-Pro/VPg-Pro­-PABP2 ou encore 6KrVPg-Pro/VPg-Pro-eiF(iso)4E-eiF(iso)4G-PABP2.

Type de document: Mémoire
Directeur de mémoire/thèse: Laliberté, Jean-François
Mots-clés libres: virus ; arn
Centre: Centre INRS-Institut Armand Frappier
Date de dépôt: 26 sept. 2013 14:45
Dernière modification: 14 déc. 2015 19:45
URI: http://espace.inrs.ca/id/eprint/310

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