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Caractérisation moléculaire et immunobiologique de la protéine EGT du granulovirus de Choristoneura fumiferana (ChfuGV)

Sawicki, Jakub (2006). Caractérisation moléculaire et immunobiologique de la protéine EGT du granulovirus de Choristoneura fumiferana (ChfuGV) Mémoire. Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en microbiologie appliquée, 156 p.

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Résumé

La tordeuse des bourgeonsde l'épinette, Choristoneura fumiferana (Clemens), est un insecte ravageur des forêts de conifères en Amérique du Nord. Les épidémies récurrentes de cet insecte causent des pertes économiques importantes de la matière ligneuse. Par conséquent, la lutte biologique contre des populations de la tordeuse constitue un enjeu important. Dans ce contexte, notre laboratoire mène un projet d'envergure visant à l'utilisation d'un baculovirus, le granulovirus de Choristoneura fum(ferana (ChfuGV), comme agent de lutte biologique pour contrôler les populations de 1'insecte. La protéine virale EGT est non essentielle à la réplication d'un baculovirus. Le fait que la protéine EGT du ChfuGV joue un rôle important dans la mue chez les larves infectées, était à l'origine de notre projet de recherche qui consistait en la caractérisation moléculaire et immunobiologique de cette protéine virale. Ainsi, lors de cette étude, le gène egt codant pour la protéine EGT a été séquencé à partir de 1'ADN viral du ChfuGV. L'analyse de la séquence nucléotidique et de la séquence déduite en acides aminés du gène egt démontrent un haut degré d'homologie avec les autres gènes egt baculoviraux. Les études comparatives des séquences en acides aminés suggèrent une homologie fonctionnelle entre la protéine EGT du ChfuGV et les protéines EGT des autres baculovirus. Par la suite, nous nous sommes intéressés à la production des anticorps polyclonaux anti-EGT par immunisation génétique afin de suivre l'expression et la propagation de la protéine EGT lors de l'infection des larves par le ChfuGV. Dans le premier temps, l'expression d'un fragment du gène egt du ChfuGV codant pour la partie C-terminale de la protéine EGT dans un système d'expression procaryote (pQE32) a permis de produire la protéine recombinante tronquée EGT589Pc d'un poids moléculaire de 32 kDa. Cette protéine a été purifiée par chromatographie d'affinité et concentrée à 0,2 mg/L. Dans un deuxième temps, la protéine EGT du ChfuGV a été produite en utilisant un système d'expression eucaryote (pcDNA3), lors de l'immunisation génétique visant à produire des anticorps polyclonaux anti-EGT chez les souris Balb/c (immunisées avec leplasmide recombinant pcDNA3-EGT). La spécificité de ces anticorps a été confirmée par immunolbuvardage de type Western en utilisant le protéine recombinante tronquée EGT589Pc comme antigène. L'étude de la cinétique de production des anticorps polyclonaux anti-EGT par immunisation génétique a permis d'observer l'apparition des premiers anticorps 42 jours suivant la première immunisation avec le plasmide recombinant pcDNA3/EGT. Par ailleurs, une meilleure production d'anticorps anti-EGT a été observée lors de l'injection du plasmide recombinant pcDNA3/EGT avec le plasmide recombinant pcDNA3/IL2 (14 jours suivant la première immunisation) ou avec le plasmide pcDNA3 (28 jours suivant la première immunisation). La production d'anticorps anti-EGT est plus importante avec l'immuno-adjuvant IL-2 (l'interleukine-2 mourine). Ce projet de recherche nous a permis de produire des anticorps polyclonaux anti-EGT par immunisation génétique. Ces anticorps seront être utilisés dans les essais immuno-histologiques visant à suivre 1'expression de la protéine EGT et à étudier son implication dans la pathogenèse associée à l'infection au ChfuGV des larves de Choristoneura fumiferana.

Type de document: Mémoire
Directeur de mémoire/thèse: Guertin, Claude
Co-directeurs de mémoire/thèse: Merzouki, Abderrazzak (École Polytechnique de Montréal)
Mots-clés libres: tordeuse ; egt ; epinette
Centre: Centre INRS-Institut Armand Frappier
Date de dépôt: 30 sept. 2013 14:41
Dernière modification: 14 déc. 2015 16:25
URI: http://espace.inrs.ca/id/eprint/288

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