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Rôle et régulation du transporteur SitABCD pour la virulence et la résistance au stress oxydatif chez la souche uropathogène CFT073

Proulx, Julie (2008). Rôle et régulation du transporteur SitABCD pour la virulence et la résistance au stress oxydatif chez la souche uropathogène CFT073 Mémoire. Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en microbiologie appliquée, 126 p.

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Résumé

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Les infections du tractus urinaire (ITUs) constituent l'une des infections bactériennes les plus courantes. Elles sont causées, dans la majorité des cas, par certaines souches d' Escherichia coli (souches uropathogènes ou extraintestinales). Les souches d'E. coli uropathogènes sont en effet responsables de plus de 80% des complications qui surviennent suite à ces infections (cystites, pyélonéphrites). Le présent projet de recherche avait pour but de caractériser le rôle du transporteur SitABCD, un transporteur de métaux de transition (manganèse et fer), dans la virulence et la résistance au stress oxydatif chez une souche uropathogène, ainsi que d'étudier plus en détailla régulation de ce système. La souche uropathogène E. coli CFf073, ayant été isolée d'un cas de pyélonéphrite aiguë, a été utilisée pour l'infection de souris femelles grâce à un modèle d'ITU ascendante. Cette même souche a servi à l'étude du rôle du système SitABCD dans la résistance au stress oxydatif, réalisée à l'aide de différents produits générant des espèces réactives de l'oxygène, tels le H202, la plumbagine, la phénazine méthosulfate et la phénazine éthosulfate. Afin d'étudier la régulation du système, plus précisément le rôle du régulateur OxyR, des vecteurs fusionnant le promoteur sitA au gène lacZ ont été construits (nombre de copies moyen et d'intégration) et l'activité du promoteur a été évaluée chez différents mutants et ce dans différentes conditions de croissance. Finalement, l'interaction entre la protéine OxyR et le promoteur de sitA a été directement évaluée à l'aide d'un test d'interaction. Les résultats obtenus démontrent une importance significative de SitABCD pour la virulence, seulement lors de la perte simultanée du système MntH (transporteur de manganèse). Ces données suggèrent un rôle partagé entre ces deux systèmes pour le transport des métaux, la résistance au stress oxydatif et la virulence. Par ailleurs, la perte de ces deux systèmes simultanément entraîne une augmentation de la sensibilité de la souche au stress oxydatif, qui semble être plus associée au H202. Étant donné l'implication du H202, le rôle d'OxyR, le régulateur de la réponse à ce composé, a été évalué. La mesure du niveau d'expression du promoteur de sitA, évalué par le dosage de la -galactosidase, a suggéré une augmentation de l'expression en présence de H202, tant lors de la croissance sur milieu riche ou pauvre en ions. L'interaction spécifique entre la protéine OxyR et le promoteur sitA a donc été étudiée. Aucune interaction directe de la protéine OxyR au promoteur sitA n'a été observée. Les résultats obtenus suggèrent que la présence des systèmes SitABCD et MntH est nécessaire pour une pleine virulence de la souche UPEC CFT073 et la résistance au stress oxydatif. De plus, malgré que l'ajout de H202 augmente l'expression du promoteur sitA en se basant sur les résultats d'expression des fusions transcriptionnelles, la protéine OxyR, régulateur de la réponse au H202, ne semble pas être impliquée directement dans cette régulation.

Type de document: Mémoire
Directeur de mémoire/thèse: Dozois, Charles M.
Informations complémentaires: Résumé avec symboles
Mots-clés libres: infection ; urinaire ; escherichia coli ; transport ; fer ; manganese ; proteine
Centre: Centre INRS-Institut Armand Frappier
Date de dépôt: 13 févr. 2013 19:21
Dernière modification: 14 déc. 2015 16:05
URI: http://espace.inrs.ca/id/eprint/270

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