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Étude d'évolution dirigée portant sur l'acétyle xylane estérase de Streptomyces lividans

Lussier, François-Xavier (2006). Étude d'évolution dirigée portant sur l'acétyle xylane estérase de Streptomyces lividans Mémoire. Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en microbiologie appliquée, 171 p.

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Résumé

L'acétyle xylane estérase de Streptomyces lividans (AxeA) est une enzyme qui hydrolyse les liens esters des groupements acétyles du xylane. Il a été démontré que 1'AxeA avait aussi la capacité de déacétyler des substrats chitineux. Cette enzyme pourrait donc être utilisée pour la production de chitosan. Cependant, l'activité enzymatique de l'AxeA envers les substrats chitineux est trop faible pour être industriellement viable. L'objectif de cette étude était d'augmenter l'activité de déacétylation de l'AxeA envers des oligomères de chitosan. L'approche expérimentale consistait à construire des librairies d'axeAtr mutés, puis à isoler les clones comportant des caractéristiques améliorées. Les librairies ont été obtenues par mutagenèse de saturation de site. Pour le criblage, 1'expression protéique et les essais enzymatiques ont été adaptés au format microplaque 96 puits. Une souche de Streptomyces lividans /::iaxeA a été construite pour la production de l'AxeAtr. Suite à différents essais, les oligomères de chitosan ont été retenus comme substrat de criblage. Afin d'identifier les clones les plus performants, 1'acide acétique libéré par la réaction enzymatique devait être quantifié. La méthode la plus couramment utilisée dans la littérature ne pouvait être adaptée au criblage à haut débit. La quantification par HPLC a donc été envisagée. Des essais préliminaires ont permis de détecter 1'acide acétique, mais des modifications au protocole doivent être apportées pour permettre une quantification précise.

Type de document: Mémoire
Directeur de mémoire/thèse: Shareck, François
Co-directeurs de mémoire/thèse: Dupont, Claude
Mots-clés libres: enzyme ; chitosan ; polymere ; acetyle
Centre: Centre INRS-Institut Armand Frappier
Date de dépôt: 27 sept. 2013 14:20
Dernière modification: 08 déc. 2015 15:42
URI: http://espace.inrs.ca/id/eprint/245

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