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Le rôle de DAP12 dans la phagocytose par les récepteurs Fc

Longtin, Angélique (2002). Le rôle de DAP12 dans la phagocytose par les récepteurs Fc Mémoire. Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en virologie et immunologie, 119 p.

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Résumé

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DAP12 est une protéine transmembranaire qui doit s'associer à un récepteur afin d'être exprimée à la surface de la cellule. Le domaine cytoplasmique de cette protéine comprend une séquence consensus ITAM ( Immunoreceptor Tyrosine-based Activation Motif) suffisante pour initier une cascade d'activation cellulaire. C'est chez les cellules NK que les fonctions associées à DAP12 ont été le mieux caractérisées, puisque plusieurs récepteurs associés à DAP12 dont la fonction est bien définie ont été identifiés chez ces ceJlules. Par contre, les fonctions attribuées aux récepteurs associés à DAP12 exprimés chez les ceJlules myéloïdes (MDL-I, SIRPB1, TREM-1, TREM-2, TREM-3) demeurent peu connues. Par conséquent, nous avons choisi d'étudier le rôle joué par DAP12 dans l'exercice de différentes fonctions du macrophage. Pour ce faire, nous avons exprimé de façon stable dans la lignée de macrophages murins RAW 264.7 une version de type sauvage et une version mutée de la protéine DAP12. Ces deux versions sont étiquetées à l'aide d'un épitope Flag (Fiag-DAP12). La version modifiée (Fiag-DAP12-Y76F) contient une mutation qui remplace le second résidu tyrosine de l'ITAM pour un résidu phénylalanine (Y75F). Cette altération prévient le recrutement de la protéine tyrosine kinase Syk à l'ITAM de DAP12 et par la même occasion inhibe les fonctions exercées par DAP12. En effet, le pontage à l'aide d'anticorps de Flag-DAP12, mais non de Flag-DAP12-Y76F, induit la sécrétion de TNF-a. Par conséquent, la surexpression de cette protéine mutée devrait avoir un effet dominant-négatif (DN) sur la cellule. Nous nous sommes ensuite intéressés aux fonctions exercées par DAP12 lors de la phagocytose via les récepteurs FcyR. Dans ces expériences, nous avons utilisé des érythrocytes de moutons opsonisés avec des immunoglobulines de type G (IgG-SRBC). La phagocytose d'lgG2a-SRBC est augmentée de façon significative chez les cellules exprimant la version mutée de DAP12. Cette hausse est due à la fois à une augmentation de la cinétique d'attachement et à une augmentation de la cinétique d'internalisation des IgG2a-SRBC. Nous avons alors analysé par microscopie confocale le processus de polymérisation de l'actine filamenteuse lors de l'attachement des lgG2a-SRBC. Ces expériences ont démontré que la formation de coupes d'actine sous la particule à ingérer est plus rapide chez les cellules exprimant la forme mutée de DAP12. Aucun effet spécifiquement associé à DAP12 n'a pu être observé lors de la phagocytose d'lgG2b-SRBC, d'lgG3-SRBC et de billes de latex nues. Nos résultats suggèrent ainsi que la protéine DAP12 est impliquée dans la phagocytose via les FcyRI, en partie grâce à une régulation négative de la polymérisation de l'actine lors de ce processus.

Type de document: Mémoire
Directeur de mémoire/thèse: Duplay, Pascale
Co-directeurs de mémoire/thèse: Descoteaux, Albert
Informations complémentaires: Résumé avec symboles
Mots-clés libres: phagocytose
Centre: Centre INRS-Institut Armand Frappier
Date de dépôt: 08 sept. 2014 15:13
Dernière modification: 14 déc. 2015 20:09
URI: http://espace.inrs.ca/id/eprint/2337

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