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Développement et caractérisatin pharmacologique de sondes peptidiques photosensibles pour l’étude du récepteur de type B de l’endothéline.

Boivin, Stéphane (2002). Développement et caractérisatin pharmacologique de sondes peptidiques photosensibles pour l’étude du récepteur de type B de l’endothéline. Mémoire. Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en sciences expérimentales de la santé, 76 p.

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Résumé

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Le photomarquage est reconnu comme un moyen efficace pour 1 'étude des complexes ligand-récepteur. Cependant, le développement de sondes photosensibles nécessaires au photomarquage impose d'apporter quelques modifications chimiques aux ligands qui, souvent, entraînent une perte d'activité biologique. Pour contrer ce problème, il est préférable de développer des petites librairies de ligands photosensibles et de tenter de minimiser l'impact de ces modifications afin de préserver l'activité et la sélectivité de ces ligands. Nous proposons donc, d'appliquer la technique de marquage par photoaffinité à l'étude des domaines de liaison des récepteurs de l'endothéline. Ce projet vise à développer et caractériser pharmacologiquement les tous premiers ligands photosensibles destinés à l'identification des acides aminés impliqués dans la reconnaissance et la stabilisation de l'endothéline au niveau de son récepteur de type B. L'IRL-1620, un analogue linéaire de ET-1 ([Suc-Glu9,Ala 11,15)-ET-1 (8-21)] est un puissant peptide agoniste spécifique du récepteur de type B de l'endothéline. En se basant sur sa structure, cinq analogues photosensibles ont été développés par synthèse peptidique en phase solide utilisant la chimie Boe. Le groupement p-benzoyl-phénylalanine (pBpa) a été choisi comme groupement photoactivable et il a été incorporé aux positions 4, 5, 7, 9 et 10 de I'IRL- 1620. Des tests pharmacologiques in vitro en bain d'organe sur le parenchyme pulmonaire du cobaye et l'aorte thoracique de rat ont permis d'évaluer l'impact (EC50) des modifications structurales apportées par le groupement photosensible sur l'activité et la sélectivité de chacun des peptides photosensibles sous leurs formes natives ainsi que mono- et di-iodées. Par la suite, des tests de liaison ont été réalisés en utilisant les sondes les plus actives, sur des cellules CHO-K1 transfectées avec le récepteur hET8 afin de caractériser leur force de liaison (IC50) avec le récepteur. L'un des cinq ligands photosensibles synthétisés, le [Tyr(125I]6,Bpa5]IRL-1620, possède les caractéristiques pharmacologiques et biochimiques requissent pour le photomarquage du récepteur ETB. En effet, il possède un effet constricteur sur le parenchyme pulmonaire [EC50 = 1 ,27 ± 0,26x 10-7M] et une forte affinité [IC50 = 1 ,82 ± 0,53x10-9M] tout en conservant sa sélectivité pour le récepteur ETB. Cet outil pharmacologique a été utilisé pour photomarquer le récepteur ETB et résulte en la formation d'un complexe ligand­ récepteur de masse moléculaire de 49 kDa. Des études complémentaires seront réalisés prochainement à l'aide de cette sonde afin de caractériser d'avantage le site de liaison de 1 'endothéline.

Type de document: Mémoire
Directeur de mémoire/thèse: Fournier, Alain
Informations complémentaires: Résumé avec symboles
Mots-clés libres: recepteur ; ligan ; endotheline ; peptide ; endothelium ; vasoconstricteur
Centre: Centre INRS-Institut Armand Frappier
Date de dépôt: 16 sept. 2015 14:12
Dernière modification: 16 sept. 2015 14:12
URI: http://espace.inrs.ca/id/eprint/2303

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