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Production et caractérisation d’un récepteur de cellule T sous la forme d’une chaîne unique soluble.

Perron, Katy (2003). Production et caractérisation d’un récepteur de cellule T sous la forme d’une chaîne unique soluble. Mémoire. Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en virologie et immunologie, 104 p.

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Résumé

Encore très peu de TCR ont été cristallographiés depuis les vingt dernières années, moment de découverte du récepteur des cellules T. Cette déficience se fait ressentir dans l'étendue des connaissances sur la molécule et les interactions avec ses ligands. Ce lent départ dans le développement de la caractérisation du TCR est principalement dû à la difficulté à obtenir le TCR dans une fonne soluble. L'existence uniquement membranaire et la difficulté de pairage des chaînes sont les obstacles principaux à la production de TCR sous une fonne soluble. La production du TCR 2.102 pourrait pennettre à long tenne l'ajout de notions supplémentaires sur le récepteur des cellules T. Cela pennettrait également de peaufiner le modèle d'étude des mécanismes de rejets de greffes basé sur la cellule T 2.102. Le présent projet de recherche vise donc à long et moyen terme, la poursuite des objectifs précédents en ayant comme défi immédiat la production du TCR 2.1 02 dans une fonne soluble. Trois approches ont été utilisées pour la production du TCR 2.102 sous la fonne d'une chaîne unique soluble mais une seule a permis d'atteindre les l'objectifs. La production en fusion avec la thioréoxineA chezE. coli n'a pas pennis de retrouver le TCR 2.102 dans la fraction soluble. De plus, il a été impossible de purifier le TCR 2.102 en fusion avec la protéine NusA, obtenu dans la fraction soluble suite à l'expression chez E. coli. C'est la production du TCR 2.102 ancré à la membrane de cellule de mammifère par un lien GPI qui a pennis de récupérer celui-ci sous une fonne soluble. Suite au clivage du lien GPI par une enzyme spécifique (la PI-PLC), le TCR 2.102 a été purifié à l'aide d'une chromatographie d'affinité aux métaux chélatés grâce à la présence d'un marqueur de six histidines ajouté lors de la construction du vecteur d'expression. Le TCR 2.102 soluble a ensuite été testé de deux différentes façons pour s'assurer qu'il reconnaissait ses ligands. La détection par cytométrie en flux de la reconnaissance des ligands, présentés par des cellules, n'a pas été concluante. Le test de compétition d'activation de cellule T, où le TCR soluble est le compétiteur, a donné des résultats préliminaires très intéressants. II semble que la présence du TCR 2.102 soluble puisse inhiber l'activation de l'hybridome T 2.102 mais des expérimentations supplémentaires devraient être réalisées. Un important problème de stabilité d'expression par les cellules de mammifère s'est traduit en de faibles rendements de TCR 2.102 solubles purifiés. Ces mauvais rendements ont considérablement affecté les tests de caractérisation. II serait impératif d'améliorer le système d'expression de façon à permettre de meilleurs rendements et par le fait même des tests plus complets et significatifs.

Type de document: Mémoire
Directeur de mémoire/thèse: Daniel, Claude
Mots-clés libres: tcr ; recepteur ; cellule ; t
Centre: Centre INRS-Institut Armand Frappier
Date de dépôt: 13 mai 2014 18:34
Dernière modification: 18 déc. 2015 19:53
URI: http://espace.inrs.ca/id/eprint/2232

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