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Le rôle du cholestérol dans l’infection de cultures cellulaires d’insectes par un baculovirus.

Deschênes, Sonia (2003). Le rôle du cholestérol dans l’infection de cultures cellulaires d’insectes par un baculovirus. Mémoire. Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en virologie et immunologie, 131 p.

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Résumé

Les baculovirus sont d'un grand intérêt pour la production de bioinsecticides ainsi que pour la synthèse de protéines recombinantes par les cellules d'insectes. Les cellules d'insectes, contrairement à celles des mammifères, ont la particularité d'être auxotrophes aux stérols, c'est-à-dire qu'elles doivent acquérir ces derniers à partir du milieu de culture puisqu'elles sont incapables de les synthétiser. Malgré ce fait, plusieurs lignées cellulaires d'insectes ont été adaptées à des milieux sans ajout lipidique et la lignée cellulaire de Spodoptera frugiperda a été adaptée, dans notre laboratoire, au milieu Mitsuhashi-Maramorosch N°8 sans sérum (Sf9 MM8-SF). Bien que ces cellules conservent un excellent taux de croissance, les virus des polyédroses nucléaires (NPV) ne peuvent s'y multiplier. Le sérum de veau fœtal (SVF) a longtemps permis d'y remédier. Par contre, de nombreux désavantages liés à son utilisation ont conduit à privilégier l'ajout de lipides commerciaux. Cependant, des anomalies morphologiques ont été notées chez les NPV produits chez les cellules cultivées en présence d'un mélange lipidique commercial. D'autre part, un ajout de cholestérol seul à une concentration de 20 J.Jg/ml s'est avéré suffisant pour obtenir une infection virale normale et complète. Tout en démontrant que l'ajout de cholestérol comme seule source lipidique était suffisant à une infection normale et complète, le présent travail a été dirigé vers l'importance et le rôle du cholestérol dans l'infection de cellules d'insectes par un baculovirus. L'utilisation d'un marqueur spécifique au cholestérol, le filipin, a permis de démontrer par cytométrie en flux, ainsi que par microscopie à fluorescence, que le cholestérol, ajouté aux cellules, s'insère dans la membrane plasmique et que celui-ci se concentre en agrégats à la surface cellulaire, ce qui pourrait représenter des micro-domaines « rafts ». L'ajout de cholestérol au moment de l'infection, et demeurant en contact avec les cellules au cours de l'infection, est amplement suffisant à une infection virale complète. L'ajout continuel de cholestérol au fil des passages ne s'est pas avéré avantageux. Ceci représente donc une diminution des coOts dans la production de baculovirus à grande échelle. Puisque l'ensemble de nos résultats ont clairement démontré l'importance du cholestérol dans l'infection baculovirale, nos travaux ont porté, par la suite, sur le rôle du cholestérol dans cette infection. Nous avons démontré que le cholestérol occupe un rôle, directement ou indirectement, au cours des premières étapes de l'interaction• entre le virus et la cellule, possiblement au niveau de l'attachement du virus aux récepteurs cellulaires eVou au cours de la fusion des membranes. Des expériences menées à l'aide de la transfection de cellules Sf9 MM8-SF par l'ADN d'AcMNPV ont permis de démontrer que le cholestérol ne semblerait pas jouer de rôle dans la réplication ni dans la synthèse de nouveaux virus ou de la libération de virus infectieux des cellules. En effet, les virus produits par les cellules Sf9 MM8-SF suite à une transfection en absence de cholestérol se sont avérés infectieux autant in vitro, chez les cellules Sf9 maintenues en présence de sérum de veau foetal (SVF), qu'in vivo, chez les larves de Gal/eria mel/one/la. Ces résultats ont permis de démontrer toute l'importance du cholestérol dans l'infection baculovirale et ont conduit à une meilleure compréhension de son rôle.

Type de document: Mémoire
Directeur de mémoire/thèse: Belloncik, Serge
Mots-clés libres: baculovirus ; bioinsecticide ; cholesterol
Centre: Centre INRS-Institut Armand Frappier
Date de dépôt: 15 mai 2014 18:25
Dernière modification: 18 déc. 2015 17:02
URI: http://espace.inrs.ca/id/eprint/2102

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