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Purification et étude des protéines PQSB de la voie de biosynthèse des HAQ chez Pseudomonas Aeruginosa.

Fauvelle, David-Alexandre (2012). Purification et étude des protéines PQSB de la voie de biosynthèse des HAQ chez Pseudomonas Aeruginosa. Mémoire. Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en microbiologie appliquée, 111 p.

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Résumé

Pseudomonas aeruginosa est une bactérie ubiquitaire d'une grande versatilité et un pathogène opportuniste. Les infections chroniques à P. aeruginosa sont une des premières causes de mortalité chez les gens atteints de la fibrose kystique. Cette bactérie est naturellement résistante à plusieurs antibiotiques communs, ce qui rend difficile le traitement de telles infections. L'expression de plusieurs gènes de virulence chez P. aeruginosa est contrôlée par des systèmes de communications intercellulaires appelés Quorum Sensing (QS). Un de ces systèmes est le régulon pqs qui •est responsable de la production de 4-hydroxy-2- alkylquinolines (HAQ) qui sont une famille de molécules qui inclut le Pseudomonas Quinolone Signal (PQS) et le 4-hydroxy-2-heptylquinoline (HHQ), son précurseur. La synthèse de ces molécules de signalisation est faite par les protéines codées par l'opéron pqsABCDE. Les rôles de PqsA ainsi que de PqsD sont connus dans la synthèse du 2,4- dihydroxyquinoline (DHQ), mais le rôle de PqsD, PqsB et PqsC dans la biosynthèse des HAQ reste à découvrir. Les travaux présentés ici ont pour but de purifier et subséquemment caractériser l'activité des protéines PqsB et PqsC. La protéine PqsB a pu être purifiée à l'aide d'une étiquette d'hexahistidine par chromatographie d'affinité et son identité a été confirmée grâce au séquençage par CUSM-SM. La protéine PqsC n'a pu être purifiée. D'autres expériences ont aussi été effectuées dans le but d'explorer l'origine des carbones de la queue aliphatique des HAQ Pour ce faire, des expériences de marquage avec l'acide dodécanoïque marqué de 23 atomes de deutérium ont été effectuées. Ces expériences ont démontré un marquage des HAQau niveau de la chaîne aliphatique. Ceci remet en question le concept généralement accepté que des acides 3-cétodécanoïques seraient des précurseurs des HAQ D'autres expériences de marquage avec de l'acide octanoïque marqué de 19 atomes de deutérium ont confirmé que l'acide octanoïque était un précurseur du HHQplutôt qu'un acide 3-cétodécanoïque. Les résultats présentés ici ont mené à une nouvelle hypothèse concernant la voie de biosynthèse du HHQ qui aurait comme précurseurs l'acide anthranilique, le malonate et l'acide octanoïque. De plus, ces résultats démontrent indirectement que les protéines PqsB et PqsC sont responsables de l'ajout de la chaîne aliphatique aux précurseurs du HHQ

Type de document: Mémoire
Directeur de mémoire/thèse: Lépine, François
Mots-clés libres: escherichia coli ; quorum ; sensing
Centre: Centre INRS-Institut Armand Frappier
Date de dépôt: 09 nov. 2015 19:19
Dernière modification: 09 nov. 2015 19:19
URI: http://espace.inrs.ca/id/eprint/1971

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