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Développement d'un test de létalité algal par cytométrie en flux.

Ménard, Lucie (1993). Développement d'un test de létalité algal par cytométrie en flux. Mémoire. Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en sciences de l'eau, 198 p.

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Résumé

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La présente étude a porté sur le développement d'un test de létalité algal en microplaque à l'aide de la cytométrie en flux. Nos efforts ont permis de combler une lacune parmi les bioessais existants. Ce test de létalité permettra de préciser d'avantage le potentiel toxique d'échantillons liquides afin de mieux appréhender les répercussions environnementales de substances pouvant entraîner des effets délétères sur la communauté phytoplanctonique. La micro-algueSelenastrum capricornutum a été retenue comme indicateur biologique au cours de ces essais. La première phase de cette recherchee est orientée vers le choix de marqueurs de viabilité. Des tests cytométriques sur le carboxy-diacétate de fluorescéine (C-FDA), le diacétate de fluorescéine (FDA) et l'autofluorescence chlorophyllienne ont permis de sélectionner deux marqueurs fiables pour révéler la viabilité cellulaire. A la lumière des résultats obtenus, suite à des déterminations de cinétiques enzymatiques effectuées avec les deux fluorochromes à différentes concentrations, notre choix s'est porté sur le FDA à une concentration de 5 µM. Les tests ont également permis de conclure que l'emploi combiné du FDA (5 µM) et de l'autofluorescence chlorophyllienne s'avère plus fiable pour détecter la viabilité cellulaire que le seul emploi du FDA. Afin de confirmer la valeur des résultats de mortalité algale obtenus par les lectures cytométriques, plusieurs tests furent réalisés. Premièrement, Je patron cytographique séparant les cellules mortes des cellules vivantes rapporté par le cytomètre a été validé à l'aide de tests de croissance en milieu solide et en milieu liquide. Deuxièmement, l'observation visuelle par microscopie à fluorescence a constitué une autre preuve des réponses cytométriques. Des tests de toxicité pour étudier l'efficacité de notre approche ont été réalisés avec deux toxiques de référence: le sulfate de cuivre et le chlorure de mercure. Les déterminations paramétriques retenues pour l'évaluation toxicologique de ces contaminants ont été la Cl50 et la CL50. La comparaison de celles-ci aura permis d'évaluer les concentrations spécifiques de chaque produit à engendrer des effets algistatiques ou algicidaux. Les résultats obtenus indiquent que le mercure (CI50: 0.008 mg/L et CL50: 0.021 mg/L) présente une plus grande toxicité pour l'algue Selenastrum capricornutum que la cuivre (CI50: 0.025 mg/L et CL50: 0.042 mg/L) De plus, cinq herbicides (atrazine, cyanazine, 2,4-0, métolachlore et diquat dibromide), parmi la liste des herbicides jugés prioritaires au Québec, ont également fait l'objet d'une évaluation algicidale et algistatique. Les résultats démontrent que les triazines et le diquat dibromide présentent un potentiel toxique plus élevé par rapport aux autres herbicides testés pour l'algue Selenastrum capricornutum. Les C1so obtenues pour la cyanazine, l'atrazine et le diquat dibromide sont respectivement de 0.059 mg/L, 0.026 mg/L et 0.009 mg/L• Les paramètres de létalité pour ces mêmes herbicides sont : 0.146 mg/L pour la cyanazine, 0.026 mg/L pour l'atrazine et 0.072 mg/L pour le diquat dibromide. Le métolachlore (CI50: 0.069 mg/L et CL50: 0.232 mg/L) et le 2,4-D (CI50: 24.16 mg/L et CL50: 33.37 mg/L) représentent les herbicides les moins toxiques de la présente étude. La procédure cytométrique s'est avérée précise à démarquer la viabilité et la mortalité cellulaire. De plus, elle s'est montrée sensible pour détecter l'atteinte précoce sur le système chlorophyllien.

Type de document: Mémoire
Directeur de mémoire/thèse: Blaise, Christian
Co-directeurs de mémoire/thèse: Couture, Pierre
Informations complémentaires: Résumé avec symboles
Mots-clés libres: algue; bioessai; cytométrie en flux; écosystème; écotoxicologie; herbicide; létalité algal; phytoplancton; Selenastrum capricornutum
Centre: Centre Eau Terre Environnement
Date de dépôt: 11 févr. 2014 15:02
Dernière modification: 24 nov. 2015 20:49
URI: http://espace.inrs.ca/id/eprint/1855

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