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Évaluation du potentiel immunomodulateur de l'EPS isolé de la souche Lactobacillus Kefiranofaciens INIX

Boudreau, Anik (2006). Évaluation du potentiel immunomodulateur de l'EPS isolé de la souche Lactobacillus Kefiranofaciens INIX Mémoire. Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en microbiologie appliquée, 114 p.

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Résumé

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La matrice polysaccharidique des grams de kéfir est composée de kéfiran, un exopolysaccharide (EPS) majoritairement produit par la bactérie Lactobacil/us lœfiranofaciens. La souche INIX de Lb. kefiranofaciens, isolée à partir de grains de kéfir dans notre laboratoire, sécrète une grande quantité d'EPS. Le premier objectif des travaux qui sont présentés dans ce mémoire est de définir la nature de l'EPS produit par la souche INJX. Le deuxième objectif est d'évaluer le potentiel immunomodulateur de l'EPS, via le profil de cytokines induites lors de tests de stimulation cellulaires in vitro et ex vivo, sur une lignée de macrophage murin (RAW 264,7) ainsi que sur des splénocytes murins. L'EPS a été soumis à différentes analyses afin de déterminer sa composition atomique, ses liaisons glycosidiques (H-RMN) et la nature de ses sous-unités mono-saccharidiques (HPLC). Les résultats obtenus ont mené à l'hypothèse que l'EPS produit par INIX serait un kéfiran mannosylé à environ 10%. Afin de caractériser le potentiel immunomodulateur de 1'EPS, il a été ajouté dans le milieu de culture d'une lignée de macrophages murins (RAW 264,7) pendant24 heures. L'EPS (1 et 10 J.lg/ml) n'a pas stimulé la transcription d'IT.,-1, une cytokine pro-inflammatoire, contrairement au LPS (0,1 et 1 J.lg/ml), un contrôle positif de stimulation, qui a induit une forte expression d'IL-l. D'autre part, l'EPS (50 J.tg/ml) a stimulé l'expression d'IT.,-12 chez les splénocytes murins, après 24 heures de stimulation, tout comme les contrôles positifs de stimulation (LPS 0,1 J.tg/ml, ConA 5 J.lg/ml). Par ailleurs, le gavage de souris BALB/C avec une solution d'EPS 1% pendant 10 jours consécutifs a augmenté la synthèse d'IL-18 dans l'iléon de ces mêmes souris. L'IT.,-12 et 1'IT.,-18 sont deux cytokines, produites entre autres par des cellules du système immunitaire (SI) inné, qui favorisent la différenciation des lymphocytes T CD4+ en cellules THl. Afin de vérifier si l'effet de l'EPS d'INIX était systémique, les splénocytes des souris gavées ont été mis en culture et 3 cytokines ont été quantifiées par ELISA après 24 et 48 heures de stimulation en présence d'IL-2 (5 ng/ml) et de ConA (5 J.lg/ml). Les splénocytes isolés de souris gavées à l'EPS sécrètent moins d'IL-4, d'IL-l 0 et d'IFN-y murin que les splénocytes isolés de souris gavées à 1'eau. Il est donc proposé que l'EPS, en activant le SI inné de façon non spécifique (production d'IL-12 et d'IL-18), favorise un profil de différenciation THI. Cette hypothèse est renforcée par le fait que les splénocytes isolés de souris gavées à l'EPS sécrètent moins d'IL-4 et d'IL-10 que ceux isolés de souris gavées à l'eau. En effet, ces deux cytokines induisent la différenciation des lymphocytes CD4T vers un profil T"2 et elles sont de plus sécrétées par les cellules TH2 différenciées. Etant donné que l'EPS ne fait qu'amorcer le processus de différenciation, il est normal que la production d'IFN-y n'ait pas été augmentée, car c'est une cytokine sécrétée en situation inflammatoire par les cellules TH1 différenciées. Certaines expériences sont finalement proposées pour confirmer que l'EPS d'INIX peut effectivement amorcer la différenciation vers un profil TH1, ainsi que certaines perspectives d'application d'un tel produit dans l'industrie.

Type de document: Mémoire
Directeur de mémoire/thèse: Dupont, Claude
Informations complémentaires: Résumé avec symboles
Mots-clés libres: eps ; inix ; lab ; kefiran
Centre: Centre INRS-Institut Armand Frappier
Date de dépôt: 25 sept. 2013 15:41
Dernière modification: 08 déc. 2015 14:44
URI: http://espace.inrs.ca/id/eprint/148

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