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Présence de facteurs de traduction dans le noyau et les vésicules du complexe de réplication des cellules infectées au Virus de la mosaïque du navet

Beauchemin, Chantal (2008). Présence de facteurs de traduction dans le noyau et les vésicules du complexe de réplication des cellules infectées au Virus de la mosaïque du navet Thèse. Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Doctorat en virologie et immunologie, 143 p.

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Résumé

Le génome de -10 kb du virus de la mosaïque du navet (TuMV) code pour une polyprotéine qui est clivée en dix protéines matures. L'ARN est polyadénylé et lié de façon covalente à son extrémité 5' à une protéine virale, la VPg. De plus en plus d'études pointent sur une implication de la VPg et ses précurseurs dans la traduction des potyvirus. Il a été montré qu'ils interagissent avec le facteur eucaryote d'initiation de la traduction (iso) 4E [e1F(iso)4E] et la protéine de liaison à la queue de poty (A) 2 (PABP2). Notre hypothèse est que la VPg et ses précurseurs sont un point d'ancrage pour la formation de complexes multiprotéiques traductionnels et réplicatifs. Dans ce projet, nous avons cherché à déterminer le rôle des interactions de VPg-Pro et 6K-VPg-Pro avec eiF(iso)4E et PABP2. D'abord, les différentes protéines ont été fusionnées avec des protéines fluorescentes et leur expression transitoire dans Nicotiana benthamiana a été évaluée par microscopie confocale. Dans les cellules saines, nous avons observé que eiF(iso)4E est principalement associée aux membranes du réticulum endoplasmique (RE) tandis que PABP2 est une protéine cytoplasmique. Dans un contexte non-infectieux, la VPg-Pro est localisée dans le nucléole et la 6K-VPg-Pro induit la formation de vésicules qui bourgeonnent des membranes du réticulum endoplasmique. Ces vésicules sont d'ailleurs connues pour contenir les complexes de réplication dans les cellules infectées. Ensuite, le site d'interaction entre les précurseurs de la VPg et les facteurs de traduction a été étudié. La méthode de la complémentation par fluorescence bimoléculaire (BiFC) a été utilisée pour observer la localisation cellulaire de l'interaction entre les précurseurs de VPg et eiF(iso)4E. La reconstitution de la fluorescence verte a été observée dans le noyau avec une accumulation préférentielle dans le nucléole lorsque les fragments scindés de la GFP ont été fusionnés à la VPg-Pro et à eiF(iso)4E. Les expériences de BiFC entre eiF(iso)4E et 6K-VPg-Pro ont montré que ces deux protéines interagissent dans les mêmes vésicules induites par 6K-VPg-Pro. Aussi, la distribution de PABP2 a été observée par co-expression de PABP2-mCherry avec les précurseurs de la VPg liés à la GFP complète. La fluorescence rouge émise par PABP2 co-localise avec la VPg-Pro et la 6K-VPg-Pro dans le nucléole et les vésicules respectivement. La distribution de PABP2 a finalement été étudiée dans des plants de Brassica perviridis infectés au TuMV. Le fractionnement cellulaire, les essais de flottaison de membranes et de gradient de saccharose ont montré que la PABP2 est redistribuée dans les mêmes membranes que 6K-VPg-Pro, associées au RE. De plus, la purification des précurseurs de la VPg par chromatographie d 'affinité par chélation de métaux des fractions membranaires indique que le facteur de traduction fait partie des complexes membranaires. En dernier lieu, un traitement alcalin des vésicules associées au réticulum endoplasmique (RE) montre que la PABP et le complexe de réplication sont localisés dans la lumière du réticulum endoplasmique. Ces résultats suggèrent que l'association de la VPg avec des facteurs de traduction est nécessaire pour deux fonctions différentes, selon le précurseur impliqué. L'interaction de VPg-Pro avec eiF(iso)4E et PABP2 pourrait être impliquée dans la déstabilisation des fonctions normales cellulaires tandis que l'interaction des facteurs de traduction avec 6K-VPg-Pro serait nécessaire pour la traduction et/ou la réplication de l'ADN viral

Type de document: Thèse
Directeur de mémoire/thèse: Laliberté, Jean-François
Mots-clés libres: virus ; mosaÏque ; navet ; tumv ; traduction
Centre: Centre INRS-Institut Armand Frappier
Date de dépôt: 11 févr. 2013 18:56
Dernière modification: 08 déc. 2015 14:32
URI: http://espace.inrs.ca/id/eprint/132

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