Louimaire, Alexandra; Létourneau, Myriam et Fournier, Alain . Phage Display: Nouvelle approche pour l'identification d'analogues spécifiques de haute affinité pour le récepteur ETA In: 3e édition, Congrès INRS-Institut Armand Frappier 2003, 6-8 novembre 2003, Stoneham.
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Résumé
Cette étude consiste à développer des mimotopes de l' endothéline-1 (ET -1) pour le récepteur ET A. Ces analogues permettront d' établir des paramètres chimiques et structuraux nécessaires à l'activation de ce récepteur. L'ET-1 est un peptide bicyclique de 21 acides aminés reconnu comme étant l'un des plus puissants vasoconstricteurs. En considérant son implication probable dans certaines pathologies du système cardiovasculaire, il serait important de caractériser ce peptide. La technique de phage display permet d'obtenir une grande variété de ligands potentiels pour un récepteur. Tout d'abord, une librairie d' ADN double brin est construite à partir d'un oligonucléotide aléatoire par PCR. Cette librairie est, par la suite, clonée dans le vecteur phagique T7 en fusion avec le gène 1OB codant pour les protéines de surface du phage. Cette construction, amplifiée chez la souche Escherichia coli BL21, permet d'obtenir des phages T7 exprimant à leur surface 415 copies du peptide encodé par la séquence donnée. Les phages sont exposés au récepteur ET A exprimés à la surface des cellules CHO. Une série de lavages permet d'éliminer les phages non liés et ceux possédant une affinité pour le récepteur sont élués par un solvant dénaturant avant d'être amplifiés. Cette étape de sélection, répétée 3 à 5 fois, est nécessaire pour obtenir une librairie de moins en moins diverse et de plus en plus enrichie de phages exposant un peptide capable de lier spécifiquement la cible. La caractérisation des peptides de haute affinité est obtenue par séquençage. Les différents peptides sont ensuite synthétisés chimiquement afin d'étudier leur activité biologique. Le phage display permet donc d'avoir de nouveaux indices sur les éléments pharmacologiques jouant un rôle dans la liaison du peptide avec son récepteur .
Type de document: | Document issu d'une conférence ou d'un atelier |
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Informations complémentaires: | Affiche scientifique |
Mots-clés libres: | - |
Centre: | Centre INRS-Institut Armand Frappier |
Date de dépôt: | 04 avr. 2018 15:05 |
Dernière modification: | 19 oct. 2023 17:50 |
URI: | https://espace.inrs.ca/id/eprint/5994 |
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