Rôle des protéines du cytosquelette dans l'apoptose des neutrophiles.
François Binet et Denis Girard
INRS-Institut Armand-Frappier
Le neutrophile possède une très courte demi-vie dans le sang (8-20hrs). Celui-ci se dirige spontanément en apoptose. Il a récemment été démontré que plusieurs protéines du cytosquelette sont dégradées par les caspases au cours de l'apoptose. Notamment, notre laboratoire a montré que la paxilline est dégradée par la VAA-I, via la caspase-3, mais nous ne savons pas s'il s'agit de la paxilline a, b, ou g. De plus, les fragments générés peuvent varier selon l'agent étudié. Par exemple, le patron de dégradation de la vimentine est différent lorsque le mercure (MeHgCl) retarde l'apoptose des NTs comparativement à l'IL-15 et à l'apoptose spontanée. Le projet vise d'abord à visualiser et comparer les fragments de protéines du cytosquelette générés suite à l'exposition à divers agents modulant l'apoptose des neutrophiles (apoptose retardée, induite ou spontanée). Puis, une étude du rôle de certains isoformes des protéines du cytosquelette sur le processus d'apoptose pourra être envisagée. En effet, il a été montré que la gelsoline, clivée par la caspase-3 pourrait induire la dépolymérisation de l'actine chez les neutrophiles. Également, la surexpression de paxilline retarderait l'apoptose induite par le retrait d'un facteur de survie (IL-3) dans des cellules pro-lymphocyte B Ba/F3. Pour ce projet, des neutrophiles humains seront fraîchement isolés et traités pour une durée variant entre 0 et 20 heures avec les différents agents mentionnés qui modulent ou non l'apoptose. Des expériences de type Western blot (2D SDS-PAGE) seront effectuées afin de localiser les protéines du cytosquelette telles: myosine, paxilline, vinculine, gelsoline et vimentine. Les résultats nous permettront, à la fois, de mieux comprendre le mode d'action des agents utilisés et, éventuellement, d'élucider le rôle direct ou indirect que peuvent jouer certains isoformes de protéines du cytosquelette dans le processus d'apoptose.