Oxygénation du trichodiène par un système acellulaire de fusarium culmorum

St-Pierre, Patrick (1999). Oxygénation du trichodiène par un système acellulaire de fusarium culmorum Mémoire. Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, Maîtrise en microbiologie appliquée, 123 p.

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Résumé

La moisissure Fusarium culmorum est reconnue pour la contamination de récoltes céréalières et la production de trichothécènes nuisibles à la santé des humains et des animaux. Une des méthodes possible pour contrôler ou prévenir la production biologique de ces mycotoxines est d'inhiber la première oxygénation du trichodiène; le premier intermédiaire spécifique à leur biosynthèse. Pour ce faire, l'objectif majeur de cette étude était d'isoler le 2a-hydroxytrichodiène comme métabolite naturel chez cette espèce et d'isoler la monooxygénase catalysant la première oxygénation. La technique d'acétylation avec [l'- 14C]anhydride acétique et l'utilisation du composé synthétisé a permis d'isoler et de purifier pour la première fois le 2ahydroxytrichodiène à partir d'un extrait du milieu de production de F. culmorum. De plus, le 12,13-époxy-9,10-trichoène-2-ol qui est un précurseur connu des trichothécènes a été isolé et purifié pour la première fois directement à partir de ce milieu. Afin de déterminer l'activité enzymatique de l'oxygénation du trichodiène, le [lia, 11~-2H2]15- 3H-trichodiène synthétisé par Marie-Claude Rousseau était nécessaire. Un test enzymatique, dépendant du NADPH et non du NADH, a démontré que l'oxygénation du trichodiène menant au 2a-hydroxytrichodiène était retrouvée dans les microsomes. De plus, l'ajout de FMN 10~ 1 FAD lOJ.IM dans les microsomes doublait l'activité, puis celle-ci était augmentée d'un facteur 2 par la solubilisation des microsomes avec une concentration finale de 0,17% du détergent Brij 35. Une électrophorèse sur gel de polyacrylamide avec une coloration au 3,3',5,5'-tétraméthylbenzidine 1 H20 2 a révélé la présence d'une bande bleue dans les microsomes ce qui correspond à la présence de noyaux hème. L'utilisation d'une colonne d'affinité 2' ,5' -ADP-Sépharose 4B n'a pas permis de récupérer l'activité de l'enzyme, ce qui laisse supposer que la réductase s'est détachée du cytochrome P450. Ainsi, ces résultats suggèrent que l'oxygénation du trichodiène soit catalysée par une cytochrome P450 monooxygénase contenant un domaine FAD et FMN.

Type de document:	Thèse Mémoire
Directeur de mémoire/thèse:	Zamir, Lolita
Mots-clés libres:	-
Centre:	Centre INRS-Institut Armand Frappier
Date de dépôt:	16 sept. 2017 11:57
Dernière modification:	10 juin 2022 12:35
URI:	https://espace.inrs.ca/id/eprint/5778

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