Caractérisation des domaines de liaison de l'Endothéline-1 sur le récepteur ETa au moyen de sondes mono- et bisubstituées avec un dérivé photoréactif

Francoeur, Eugène (2008). Caractérisation des domaines de liaison de l'Endothéline-1 sur le récepteur ETa au moyen de sondes mono- et bisubstituées avec un dérivé photoréactif Mémoire. Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en sciences expérimentales de la santé, 77 p.

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Résumé

La transcription des symboles et des caractères spéciaux utilisés dans la version originale de ce résumé n’a pas été possible en raison de limitations techniques. La version correcte de ce résumé peut être lue en PDF. L'endothéline (ET), un des plus puissants agents vasoconstricteurs connus à ce jour est un peptide de 21 acides aminés porteur de deux ponts disulfures caractéristiques. Ce peptide agit via les récepteurs ETA (ETAR) et ET8 (ET8R) au niveau de plusieurs organes afin d'induire des réponses telles que la constriction de vaisseaux sanguins et de muscles lisses ou la sécrétion hormonale. Ce peptide-hormone est vraisemblablement impliqué dans diverses pathologies comme l'hypertension, l'infarctus du myocarde et l'asthme. Beaucoup de recherches sont donc menées afin de comprendre les mécanismes d'actions, à l'échelle moléculaire, du système de l'endothéline et des évènements qui sont à l'origine de disfonctionnement relié à ce peptide. Afin d'en apprendre davantage sur la nature de la liaison de l'ET-1 avec le ETAR, nous avons procédé à des essais de marquage par photoaffinité de ce récepteur et pour y parvenir nous avons appliqué une stratégie de synthèse de l'ET-1 établie à partir des données de structure-activité recueillies dans la littérature. Nous avons ainsi produit des analogues présentant un ou deux résidus photoactivables p-benzoyl-phenylalanine (p-Bpa) d'orientation Lou Den position 4 et/ou 12. C'est à la suite de caractérisations physiques (CLHP et MS) et biologiques (essais de liaison et bioessais pharmacologiques) de ces sondes que nous en sommes venus à sélectionner les peptides [L-Bpa4, Nle7]hET-1, [Nle7, L-Bpa 12]hET-1 et [L-Bpa4, Nle7 L-Bpa 12]hET-1 pour nos travaux. La stéréochimie s'est révélée déterminante puisque l'incorporation de D-Bpa en position 4 et/ou 12 a eu un impact néfaste au niveau de la liaison au récepteur, ou de l'activation de celui-ci. L'incorporation d'un isotope radioactif (1251) sur la tyrosine-13 de la sonde a permis d'assurer le suivi de celle-ci lors des différentes étapes menant à la production et la caractérisation du complexe de photomarquage constitué d'une des 3 sondes et du ETAR. A l'aide d'expériences de clivage du complexe par digestions chimiques ou enzymatiques, il a été possible d'identifier le domaine de liaison de l'ET-1 dans le récepteur. Ainsi, la sonde [L-Bpa 4, Nle7]hET-1 semble établir un point de contact au niveau du segment His66-Trp146 Ensuite, la réaction de marquage par photoaffinité de ce récepteur s'est effectuée aux abords de la région délimitée par les acides aminés Phe147 et Lys166 du ETAR lorsque qu'était utilisé l'analogue [Nle7, L-Bpa 12]hET-l. . Enfin, ces expériences impliquant la sonde bivalente [L-Bpa4, Nle7, L-Bpa12]hET-1 ont permis d'établir que le site de liaison était situé à l'intérieur de la séquence Gly42- Arg183 du récepteur. Ces résultats laissent supposer que le phénomène de liaison de l'ET-1 au niveau du ETAR implique les domaines transmembranaires (TM) 1, II, III ainsi que la première boucle extracellulaire (EC). Ces résultats se veulent complémentaires aux données mises de l'avant par des expérimentations impliquant l'utilisation d'ETAR mutés ou chimères ou d'analyses par modélisation moléculaire qui offrent une appréciation indirecte ou virtuelle du phénomène.

Type de document:	Thèse Mémoire
Directeur de mémoire/thèse:	Fournier, Alain
Informations complémentaires:	Résumé avec symboles
Mots-clés libres:	-
Centre:	Centre INRS-Institut Armand Frappier
Date de dépôt:	11 oct. 2013 18:55
Dernière modification:	02 mars 2022 19:05
URI:	https://espace.inrs.ca/id/eprint/205

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