Implication du CD45 dans l’activation et la localisation du DFF40 chez les lymphocytes T.

Dupéré-Minier, Geneviève (2004). Implication du CD45 dans l’activation et la localisation du DFF40 chez les lymphocytes T. Mémoire. Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en sciences expérimentales de la santé, 116 p.

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Résumé

Les travaux de notre laboratoire sur l'induction de l'apoptose par des agents perturbant le potentiel mitochondrial ont permis de mettre en évidence l'importance de la tyrosine phosphatase CD45. En absence du CD45, un régulateur de l'activité de plusieurs membres de la famille des tyrosines kinases Src, il y a inhibition de l'apoptose nucléaire bien que l'activation de la caspase-3 et le clivage du DFF45 ont lieu. Notre hypothèse est que l'absence du CD45 est responsable de l'activation inadéquate de l'endonucléase DFF40. Cette hypothèse repose sur l'importance des efflux de chlore pour la fragmentation de l'ADN, le rôle de la famille des tyrosines kinases Src dans la fonction de ces canaux et l'activité régulatrice du CD45 sur ces kinases. Le but du projet d'étude est d'identifier le rôle du CD45 dans l'activation du DFF40 chez des lymphocytes exposés à des perturbateurs mitochondriaux. Nous avons exposé des lymphocytes T HPBALL (CD45+) et HPB45.0 (CD45-) à des agents chimiques induisant l'apoptose. La localisation du DFF40 a été déterminée dans les fractions cytosoliques et nucléaires. Le volume cellulaire, le flux ionique et l'acidification intracellulaire ont été déterminés par cytométrie en flux. Pour vérifier l'importance de l'homéostasie ionique, des mi l ieux hypo- et hypertoniques ont été utilisés. L'implication de l'activation des canaux de chlore par phosphorylation sur les résidus tyrosine a été évaluée par immunobuvardage de type western. Chez les HPB45.0, il y a absence de l'activité du DFF40 et perturbation de sa migration vers le noyau. Associées à ces changements, il y a diminution de la perte de volume et de l'acidification intracytoplasmique. L'analyse des canaux de chlore, à la suite de leur immunoprécipitation démontre une absence de la phosphorylation sur les résidus tyrosine chez les cellules CD45-. Le CD45 joue donc un rôle important dans la régulation des canaux de chlore et dans la régulation ionique de la cellule en perturbant l'activité des canaux de chlore régulée par la famille Src. La perturbation des efflux de chlore expliquerait l'absence d'activité du DFF40 et de sa localisation intracytolplasmique.

Type de document:	Thèse Mémoire
Directeur de mémoire/thèse:	Bernier, Jacques
Mots-clés libres:	apoptose ; lymphocyte ; t
Centre:	Centre INRS-Institut Armand Frappier
Date de dépôt:	14 nov. 2013 19:59
Dernière modification:	14 déc. 2015 19:57
URI:	https://espace.inrs.ca/id/eprint/1679

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