Mise en place et optimisation des conditions de production et de cristallisation de protéines impliquées dans les systèmes de motilité chez les bactéries à Gram négatif

Dazhong, Zheng (2020). Mise en place et optimisation des conditions de production et de cristallisation de protéines impliquées dans les systèmes de motilité chez les bactéries à Gram négatif Mémoire. Québec, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique et Université Clermont Auvergne, Maîtrise en sciences expérimentales de la santé, 91 p.

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Résumé

La motilité chez les bactéries est regroupée en 6 catégories. Ici, nous nous sommes intéressés à 2 d'entre-elles dans 2 organismes différents : (i) la motilité de type twitching chez Neisseria meningitidis et la motilité « sociale » chez Myxococcus xanthus, les deux sont médiées par les pili de type 4, et (ii) la motilité de type gliding chez M. xanthus. L'objectif final de ces études est l'obtention de différentes structures cristallographiques protéiques dans les deux types de motilités. Concernant Neisseria meningitidis, nous nous sommes intéressés au mécanisme d'adhésion de la cellule à sa cible grâce à l'extrémité de son pilus de type 4. Chez Myxococcus xanthus, les études sur la motilité de type sociale portent sur la sécrétion de différents polysaccharides à travers différents translocons protéiques Wza. Quant aux études sur la motilité de type gliding, elles sont axées sur la translocation d'une adhésine, CglB, à travers un complexe de la membrane externe (GltA, GltB et GltH), ainsi que sur les protéines chaperonnes (GltK et GltF) qui permettent le bon fonctionnement de CglB. Ces 3 projets sont nouveaux et requièrent donc beaucoup d'étapes d'optimisation, comprenant la conception des amorces, les conditions d'expression des protéines, les méthodes de purification et les conditions de stabilisation des protéines purifiées ainsi que les conditions de cristallogenèses.

Bacterial motility can be categorized into six types. Here, we focused on two of them: (i) twitching motility in Neisseria meningitidis and "social" motility in Myxococcus xanthus, both mediated by type 4 pili, and (ii) gliding motility in Myxococcus xanthus. The aim of these studies is to obtain various crystallographic structures of the proteins within these motilities systems. ln Neisseria meningitidis, we are interested in how the tip of type IV pili tether the target. ln Myxococcus xanthus, various polysaccharides secreted through Wza translocons, involve in social motility, have been studied. Concerning gliding motility, the translocation of an adhesin, CglB, through an outer membrane platform (composed by GltA, GltB and GltH) has also been studied. Moreover, CglB requires the presence of the proteins GltK and GltF to function properly. These 3 projects are new and require considerable steps of optimization, including primer design, plasmid expressions, protein purification methods and crystallogenesis conditions

Type de document:	Thèse Mémoire
Directeur de mémoire/thèse:	Calmettes, Charles
Co-directeurs de mémoire/thèse:	Bamdad, Mahchid (Université Clermont Auvergne)
Mots-clés libres:	Cristallogenèse ; Expression ; Purification ; motilité ; Pili de type IV ; Wza ; gliding ; Neisseria meningitidis ; Myxococcus xanthus; Crystallogenesis ; Expression ; Purification ; motility ; Type IV Pili
Centre:	Centre INRS-Institut Armand Frappier
Date de dépôt:	15 août 2024 04:56
Dernière modification:	15 août 2024 04:56
URI:	https://espace.inrs.ca/id/eprint/15909

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