HS2 et HS3 du locus de contrôle de la Béta-globine: deux effets de positions et mécanismes d’activation transcriptionelle.

Jean-Simon Diallo, Nathalie Delvoye, Anne Fejes, Anne-Marie Mes-Masson, Lee-Wall

CR-CHUM et Institut du cancer, Hôpital Notre-Dame, Université de Montréal

Le locus de contrôle (LCR) de la b-globine humaine est un activateur tissu-spécifique composé de quatre sites hypersensibles à la DNaseI (HS 1 à 4). Le LCR de la b-globine confère aux gènes de la globine, une expression forte et indépendante de la position d'intégration. Chaque HS peut fonctionner séparément; par contre, certaines données suggèrent qu'ils fonctionnent par des mécanismes différents. Dans l'étude suivante, nous avons exploré cette possibilité en évaluant quels types d'effets de positionnement affectent l'expression du gène de la b-globine humaine lié soit au mLCR, HS2 ou HS3 à partir de sites d'intégration variés. Nous avons utilisé la technique de cytométrie en flux (FACS) couplée à de l'immunochimie pour détecter l'expression de la b-globine humaine dans des cellules érythro-leucémiques de souris (MEL) individuelles. Ces MELs (souche c88) furent induites à produire la b-globine humaine soit en les traitant au DMSO 2% ou au TSA 10nM pour approfondir nos connaissances sur les mécanismes moléculaires de ces activateurs. Nos résultats suggèrent que 1) HS3 est un activateur qui est généralement plus fort que HS2. 2) HS2 est affecté exclusivement par un effet de position "gradé" tandis qu'HS3 (et le mLCR de façon moindre) semble être affecté exclusivement par la variégation (PEV). 3) La variégation disparait dans les clones contenant HS3 ou le mLCR suivant un traitement au TSA mais ne change point les effets de positionnement observés pour les clones contenant HS2. 4) L'expression des cellules exprimantes semblait proportionelle au nombre de copies pour HS3 mais non pour HS2. Ces données en combinaison à celles de la littérature suggèrent qu'HS2 et HS3 fonctionnent par deux mécanismes différents où HS2 jouerait un rôle dans l'acétylation des histones/ protection contre la méthylation de l'ADN et l'ouverture de la chromatine tandis qu'HS3 augmenterait le nombre de transcrits totaux dans chaque cellule exprimant déjà.