Assemblage in vitro de la protéine de coque du PapMV

Marie-Hélène Tremblay, Nathalie Majeau, Marilène Bolduc, Denis Leclerc.

Centre de recherche en Infectiologie, Université Laval

Le Virus de la mosaïque de la Papaye (PapMV) est un virus à simple brin d'ARN positif faisant partie de la famille des potexvirus. Les particules virales de PapMV sont composées d'un brin d'ARN et de plusieurs centaines de sous-unités de la protéine de la capside, la seule protéine structurale du virus. Les interactions entre les sous-unités d'assemblage ainsi qu'avec l'ARN génomique sont toujours inconnues. Dans le but de mieux caractériser les domaines de la protéine de coque impliqués dans la formation de la capside virale, nous avons étudié plusieurs versions tronquées de la protéine qui ont été testé in vitro pour leur capacité à auto assembler en pseudo-particules virales. Nous avons produit une protéine recombinante de coque du PapMV et quatre versions tronquées de celle-ci dans E. coli. Les protéines, fusionnées à une queue d'histidine, ont été purifiées par affinité en conditions natives sur colonnes de nickel. Nous avons assemblé in vitro les protéines recombinantes du PapMV avec un transcrit de l'ARN viral produit avec l'ARN polymérase du phage T7. Une comparaison, en microscopie électronique, entre les pseudo-particules virales et des particules virales purifiées à partir de plants de papaye infectés nous a permis de constater que l'apparence des pseudo-particules virales obtenues à partir de la protéine de coque recombinante complète produite dans E. coli est similaire à celle des virions purifiés à partir des plants de papaye infectés. Les versions tronquées de la protéine de coque ne forment pas de pseudo-particules aussi bien définies. Les délétions faites dans le gène de la protéine de capside influencent la capacité de la protéine à assembler l'acide nucléique. De plus, nous avons introduit une série de mutations spécifiques dans la protéine de coque afin d'identifier les acides aminés importants pour l'interaction avec l'ARN viral. Huit protéines recombinantes contenant ces mutations seront analysées par mobilité sur gel d'électrophorèse et pour leur capacité à former des pseudo-particules.