Caractérisation de HTDE, une nouvelle protéine transmembranaire

François Veillette, Anne-Marie Mes-Masson

CR-CHUM et Institut du cancer, Hôpital Notre-Dame, Université de Montréal

Introduction: Dans le laboratoire, nous disposons de plusieurs lignées de souris transgéniques porteuses de l'antigène grand T du virus de Polyome (Py LT-Ag). Ces souris sont un bon modèle pour l'étude de la progression tumorale. Ces souris développent des tumeurs, mais la latence avec laquelle ces tumeurs apparaissent suggère l'existence d'événements secondaires à l'expression de Py LT-Ag nécessaires à l'apparition d'une tumeur. Ce modèle de souris a permis l'identification et le clonage d'un nouveau gène, htde (human tumor differentially expressed), qui est exprimé différentiellement dans plusieurs tumeurs.

Résultats: Le gène htde code pour une protéine de 473 acides aminés dont la fonction est aujourd'hui inconnue. Cette protéine fait partie d'une nouvelle famille de protéines avec des homologues conservés de la levure à l'humain. L'analyse de la séquence montre que la protéine posséde plusieurs hélices alpha et domaines hydrophes, ce qui suggère que la protéine est associée à une membrane. Nous avons généré une protéine de fusion HTDE-GFP et nous avons montré que la protéine est localisée à la membrane plasmique dans des cellules H293 et A549. Dans le but de caractériser le rôle de HTDE dans l'immortalisation cellulaire, nous l'avons transfecté dans des fibroblastes embryonnaires de rat (REFs) et nous avons investigué son potentiel immortalisant in vitro comparé à Py LT-Ag. Il a été montré que HTDE peut induire la formation de foyers in vitro. Des études visant à caractériser son potentiel transformant in vivo sont en cours. Vu la difficulté à obtenir des anticorps spécifiques contre HTDE, nous avons également cloné HTDE en fusion avec la protéine MYC afin de pouvoir suivre son expression par western blot et immunohistochimie. L'étude des modifications post-traductionnelles de HTDE montre que la protéine est glycosylée et les études de phosphorylation sont en cours. Nous sommes en train de construire une nouvelle souris transgénique exprimant HTDE sous le contrôle du promoteur de la kératine 19 (K19). Cette nouvelle souris exprimera HTDE dans une variété de tissus possédant des épitheliums simples privilégiés pour le développement de tumeurs. De plus, nous pourrons obtenir des doubles transgéniques en croissant la souris K19-HTDE avec la K19-Py LT-Ag que nous possédons déjà.

Conclusions: HTDE est une protéine transmembranaire localisée à la membrane plasmique et c'est une protéine glycosylée. HTDE est surexprimé dans plusieurs modèles de tumeurs. L'utilisation de souris transgéniques exprimant HTDE devrait nous aider à suggérer une fonction pour cette protéine et confirmer si elle a un rôle dans la tumorigénèse.