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Clonage et séquençage du gène de la cellulase B de Streptomyces lividans 66 et caractérisation de l'enzyme.

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Wittman, Sylvie (1993). Clonage et séquençage du gène de la cellulase B de Streptomyces lividans 66 et caractérisation de l'enzyme. Mémoire. Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maitrise en microbiologie appliquée, 134 p.

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Résumé

La souche sauvage Streptomyces lividans 66 produit plusieurs enzymes lignocellulolytiques dont la cellulase B. Afin de faciliter le séquençage du gène cel B, il a été souscloné chez Escherichia coli. observées avec des Des homologies de séquences sont cellulases provenant d'autres micro-organismes. Conséquemment, la cellulase B fait partie des glucanases de la famille H. Les domaines catalytiques et de liaison à la cellulose se retrouvent respectivement dans la portion N-terminale et C-terminale de la protéine.

La cellulase B est une enzyme extra-cellulaire qui est produite par le clone s .lividans IAF 9/8-83 en milieu M13 modifié contenant 1% de xylose. Malgré la grande instabilité de l'enzyme, la forme native a été isolée.

Les propriétés physico-chimiques de la cellulase B purifiée ont été déterminées. La masse moléculaire (36 kDa) et le p.I. (4.2) de l'enzyme sont déterminés respectivement par SOS-PAGE et par isoélectrofocalisation. L'activité enzymatique est optimale à pH 6.5 et à une température de 60°C. L'activité spécifique de l'enzyme est de 98 U.I.fmg. Les valeurs de Km et de Vmax sont respectivement de 1.3 mg/ml et de 110 U.I.fmg en utilisant la carboxyméthylcellulose comme substrat.

La cellulase B n'hydrolyse pas les cellooligosaccharides inférieurs à G4 • L'enzyme dégrade facilement le G4 , le G5 et le G6 , et des réactions de transglycosylation sont observées.

Type de document: Thèse Mémoire
Directeur de mémoire/thèse: Morosoli, Rolf
Mots-clés libres: -
Centre: Centre INRS-Institut Armand Frappier
Date de dépôt: 22 août 2019 15:26
Dernière modification: 22 août 2019 15:26
URI: http://espace.inrs.ca/id/eprint/8543

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