Structure et fonction de la protéine MntH d'Escherichia coli.

Pascal Courville, Roman Chaloupka et Mathieu F.M. Cellier

INRS-Institut Armand-Frappier

Les “transporteurs de manganèse dépendant du proton” (MntH) chez les procaryotes sont des perméases de type symporteur facilitant l'acquisition de cations divalents comme le fer et le manganèse en utilisant le gradient électrochimique du proton comme source d'énergie. On distingue trois groupes phylogénétiques de séquences MntH A, B et C, qui est subdivisé en Cα, Cβ et Cγ. Les protéines MntH appartiennent à la famille “Natural resistance associated-macrophage protein” (Nramp) commune aux organismes eucaryotes. Les protéines parologues Nramp1 et 2 des mammifères sont importantes respectivement dans la défense contre certains pathogènes et dans le métabolisme du fer. La caractérisation moléculaire de ces perméases représente un défi de taille de par leur nature de protéines intégralement membranaires et peu de données sont connues sur leur aspect structural et sur le mécanisme d'action de ces transporteurs.

Nous avons entrepris d'élucider la topologie de MntH A de Escherichia coli (EcoliA) selon une approche génétique en fusionnant ou en insérant des gènes rapporteurs codant pour la β-lactamase et pour la chloramphénicol acétyl transférase, qui sont actives dans le périplasme et dans le cytoplasme, respectivement. Les résultats obtenus démontrent 11 segments transmembranaires avec les extrémités N-terminale du côté cytoplasmique et C-terminale dans l'espace périplasmique, en accord avec une prédiction topologique consensus. La topologie de EcoliA a été validée en obtenant des protéines hybrides et fonctionnelles transportant les métaux et les protons.

Cette étude a révélé que la moitié N-terminale de EcoliA suffit pour lier les métaux. Dans le but d'identifier les résidus impliqués dans le transport des métaux nous avons sélectionné la première boucle périplasmique car elle jouerait un rôle crucial pour le fonctionnement de la protéine Nramp2. Nous étudions l'impact sur l'activité de EcoliA de mutations ponctuelles ciblant des positions selon leur taux de conservation dans la famille Nramp.