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Identification d'un facteur cellulaire interagissant avec la proteine UL24 du virus de l'Herpés Simplex 1.

Rakotomanga, Miharisoa Mirana (2014). Identification d'un facteur cellulaire interagissant avec la proteine UL24 du virus de l'Herpés Simplex 1. Mémoire. Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en virologie et immunologie, 92 p.

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Résumé

Le gène u/24 du virus de l'herpès simplex 1 (VIIS-1) est conservé parmi les membres de la famille des Herpesviridae. La protéine multifonctionnelle UL24 est importante pour la réplication en culture cellulaire et in vivo dans un modèle murin d'infection oculaire. Un virus déficient en UL24 démontre des plages de lyse syncytiales où les membranes des cellules infectées tùsionnent de manière aberrante. D'une part, le domaine N-terminal de la protéine est hautement conservé parmi les orthologues d'UL24. Lorsque ce domaine est exprimé seul, il se localise au noyau el il a été démontré qu'il était suffisant pour induire des modifications au nucléole causées par le VHS-1. D'autre part, le domaine C-terminal, faiblement conservé, se localise dans le cytoplasme et dans l'appareil de Golgi lorsqu'il est exprimé seul. Dans cette étude, notre hypothèse est que la partie C-terminale de la protéine UL24 interagirait avec des protéines cellulaires qui interviendraient dans le rôle de la protéine dans le cytoplasme. Afin de tester cette hypothèse, un criblage double hybride chez la levure a été effectué. Pour cela, la partie C-terminale d'UL24 (aa 190-269) a été utilisée comme appât pour cribler une librairie de protéines provenant de cellules HeLa S3. Sur 9xl 07 clones criblés, quatre clones remplissaient tous les critères d'interaction. Les séquences de ces clones correspondaient toutes, en partie ou en totalité, à la séquence codante de la forme mature de la protéine ClQBP. CIQBP est une protéine multifonctionnelle qui se localise dans le cytoplasme et dans le noyau et qui joue plusieurs rôles dans différentes infections virales. L'interaction de la forme mature de CIQBP avec la forme entière de la protéine UL24 a été confirmée dans le système double hybride. Par la suite, des essais de co-immunoprécipitation dans des cellules HeLa infectées avec le virus ont montré que C 1 QBP est présente lorsqu'on précipite UL24. Des essais d'immunofluorescence indirecte et microscopie confocale ont par ailleurs montré que les deux protéines colocalisent dans le cytoplasme des cellules HeLa et des cellules HFF. On a voulu ensuite déterminer l'importance de Cl QBP lors de l'infection par le VHS-1. Pour cela, une réduction de l'expression de C 1 QBP par une approche d'interférence ARN a été réalisée. La diminution de l'expression de ClQBP ne semblait pas affecter ni la réplication ni la dissémination du virus en culture cellulaire. Des études supplémentaires sont nécessaires pour caractériser l'interaction entre UL24 et CIQBP et comprendre son rôle lors de l'infection par le VHS-1 in vitro et in vivo.

Abstract

The herpes simplex virus (HSV-1) gene u/24 is conserved among ali llerpesviridae family members. The multifunctional UL24 protein is important for viral replication in vitro as weil as for pathogenesis in a mouse madel of ocular infection. Mutations in the u/24 gene also lead to syncytial plaques in infected cells. The N-terminal domain of UL24 is highly conserved among orthologs of the protein. This domain is located in the nucleus when expressed alone, and is sufficient to induce nucleolar modifications. Little is known about the role of the C-terminal domain of UL24, which is poorly conserved. When expressed alone, this part of the protein is found in the cytoplasm and the Golgi apparatus. In this study, we hypothesized that the Cterminal domain of UL24 can interact with cellular factors involved in cytoplasmic functions of the protein. To test this hypothesis we performed a yeast two-hybrid screen using the C-terminal domain of UL24 (aa 190-269) as hait to screen a HeLa S3 cell library fused to the GAL4 activation domain. From a total of9xl07 transformants screened, four clones fulfilled the criteria for interaction of gene products. The gene sequences of these clones ail corresponded to the coding sequence of the mature form of ClQBP. ClQBP is a multifunctional protein located in the cytoplasm and nucleus and has been shawn to play a role in different viral infections. We confirmed the interaction between the full length UL24 protein with the mature form of Cl QBP in the yeast two-hybrid system. Co-immunoprecipitation assays showed that the two proteins interact in infected HeLa cells. Indirect immunofluorescence studies also demonstrated the colocalization of UL24 and Cl QBP in the cytoplasm of infected HeLa and HFF cells. Next, we wanted to test the importance of ClQBP in HSV-1 infection. By an siRNA approach, we reduced the level of ClQBP expression in HeLa cells. We infected these cells with the strain KOS at low and high multiplicities of infection. We observed that the knock-down of ClQBP reduced neither viral replication nor dissemination in cell culture. Further studies are needed to characterize the UL24-C1QBP interaction and to investigate its role in HSV-1 infection bath in vitro and in vivo.

Type de document: Mémoire
Directeur de mémoire/thèse: Pearson, Angela
Mots-clés libres: VHS
Centre: Centre INRS-Institut Armand Frappier
Date de dépôt: 16 mars 2016 20:54
Dernière modification: 16 mars 2016 20:54
URI: http://espace.inrs.ca/id/eprint/3358

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