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L'importance des résidus hautement conservés de la protéine virale UL24 dans la pathogenèse du virus de l'herpès simplex 1

Leiva-Torres, Gabriel A. (2008). L'importance des résidus hautement conservés de la protéine virale UL24 dans la pathogenèse du virus de l'herpès simplex 1 Mémoire. Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en virologie et immunologie, 78 p.

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Résumé

La majorité des adultes nord-américains sont infectés par le virus de 1 'herpès simplex 1 (VHS-1 ). Typiquement, après une infection oro-labiale, le virus infecte les neurones sensitifs et établit la latence dans les ganglions trigéminaux. Périodiquement, le virus se réactive, causant des infections récurrentes. Dans un modèle murin d'infection oculaire, les virus déficients en UL24 (UL24X) ont une réplication oculaire diminuée, une réplication neuronale fortement réduite et une réactivation pratiquement absente. Contrairement au virus de type sauvage (KOS), UL24X forme des plages de lyse syncytiale à des températures élevées et a une réplication réduite. UL24 est très conservé chez les Herpesviridae. Cinq domaines d'homologie ont été identifiés, dans lesquels plusieurs acides aminés sont hautement conservés dont certains formeraient un motif d'endonucléase de type PD (D/E)xK. Notre hypothèse est que ces résidus hautement conservés sont importants pour la pathogenèse du VHS-1 . Afin de tester notre hypothèse, nous avons généré plusieurs versions mutantes du gène UL24 codant pour une ou deux substitutions d'acides aminés hautement conservés. Des virus recombinants ont été produits en co-transfectant un vecteur contenant le gène UL24 muté et l'ADN viral infectieux de vUL24 eGFPB contenant une cassette eGFP dans le cadre de lecture ouvert d'UL24. Les recombinants ont été criblés par la perte de fluorescence. Trois virus ont été produits : vUL24 E99AK 101 A, ciblant le site catalytique de la fonction putative d'endonucléase, vUL24 G 121 A, ciblant un résidu situé dans un domaine d'homologie adjacent à celui du motif d'endonucléase et vUL24 Q154A, visant un résidu hautement conservé du cinquième domaine. À 39°C, vUL24 Q154A a formé de petits syncytiums, vUL24 G 121 A a produit des syncytiums de taille moyenne et vUL24 E99AKIOIA a produit de gros syncytiums comparables à ceux d'UL24X. Aussi, la mutation des résidus E99 et K 101 a engendré une baisse de la réplication virale. Afin de déterminer l'effet de ces mutations sur la pathogenèse, les vtrus recombinants ont été testés dans un modèle murin d'infection oculaire. En mutant le résidu Q154A, peu d'effets ont été observés sur la réplication aiguë oculaire, tandis que la réplication aiguë neuronale a été réduite. Lors des essais de réactivation d'explants de ganglions trigéminaux, le taux de réactivation des ganglions infectés par vUL24 Q154A était de 50%. vUL24 Gl21A a eu une réplication aiguë oculaire et neuronale similaire au virus KOS et un taux de réactivation semblable a celui du virus de type sauvage. Chez vUL24 E99AKI01A, la réplication aiguë oculaire a été inférieure à celle de KOS et la réplication neuronale a été diminuée de plus de 2 logs. Aussi, la réactivation a été observée chez moins de 40 % des ganglions infectés. Cette étude a permis de déterminer que le site catalytique potentiel était crucial pour la pathogenèse du virus, tandis que le résidu Q154 a eu une importance moindre et que G121 était peu important pour la pathogenèse du VHS-1, malgré sa forte conservation et que la substitution de ce résidu cause la fom1ation de plages syncytiales. Aussi, nous corroborons l'hypothèse qu'UL24 pourrait être une protéine multifonctionnelle, puisque la mutation du motif d'endonucléase n'a pas produit un phénotype similaire à celui d'UL24X.

Type de document: Mémoire
Directeur de mémoire/thèse: Pearson, Angela
Mots-clés libres: vhs
Centre: Centre INRS-Institut Armand Frappier
Date de dépôt: 13 févr. 2013 19:14
Dernière modification: 22 déc. 2016 20:09
URI: http://espace.inrs.ca/id/eprint/239

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