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Identification et caractérisation des allopeptides naturels reconnus par la cellule T 2.102

Hébert, Caroline (2005). Identification et caractérisation des allopeptides naturels reconnus par la cellule T 2.102 Mémoire. Québec, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique, Maîtrise en virologie et immunologie, 86 p.

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Résumé

La réponse allogénique est caractérisée par une fréquence élevée de précurseurs de cellules T capables de reconnaître les molécules du CMH allogéniques. En effet, 1 à 1 0% des cellules T périphériques répondent aux alloantigènes, ce qui s'avère être un obstacle majeur aux transplantations. Il a été démontré que les peptides du soi associés aux molécules du CMH jouent un rôle crucial dans l'alloréactivité. Les progrès réalisés sur l'identification et la caractérisation de ces peptides ont jusqu'ici été principalement réalisés sur des systèmes impliquant des molécules du CMH 1. L'absence d'un système de CMH II soi/alloréactivité limite nos connaissances sur les mécanismes moléculaires d'interaction TCR-peptide-CMH du soi vs TCR-peptide-CMH alloréactif. Un modèle d'étude du rejet de greffe utilisant diverses souris transgéniques a donc été mis au point dans notre laboratoire. Dans ce cadre, notre modèle CMH II est basé sur le clone de cellule T CD4+ 2.102. Ce clone est spécifique au peptide de l'hémoglobine Hb(64-76) lorsque présenté par une molécule du CMH II I-Ek du soi. La cellule T 2.102 est également alloréactive contre la molécule du CMH II l-EP où le ou les peptides naturels présentés ne sont pas encore connus. L'objectif de ce projet est d'identifier et de caractériser ces peptides naturels à l'aide d'une purification des molécules du CMH II par chromatographie d'affinité et la caractérisation des peptides associés aux molécules. Les complexes CMH II l-EP/peptide ont été purifiés par chromatographie d'affinité à partir de la lignée cellulaire CH27-EP-EPM. Cette lignée cellulaire exprime constitutivement les complexes CMH II l-EP/peptide EPM. Le peptide EPM, généré suite au criblage d'une banque peptidique combinatoire, a été utilisé pour valider la méthode. Une fois les complexes CMH II l-EP/peptide purifiés, les peptides ont été dissociés des molécules du CMH II par traitement acide puis séparés par HPLC. Nous avons démontré que certaines fractions d'HPLC peuvent reconstituer l'alloréactivité de la cellule T 2.102. En particulier, les fractions obtenues à 50,5, 58 et 64 minutes sont celles capables de stimuler le plus fortement la cellule T 2.102. Ces fractions ont été analysées par spectrométrie de masse. Deux peptides ont été identifiés dans les fractions à 50,5 min et 64 min. Le premier correspond aux 13 acides aminés de l'épitope EPM. Le second peptide correspond aux 13 acides aminés de l'épitope EPM additionné d'une glycine et d'une sérine à l'extrémité C-terminale. Ces deux derniers résidus proviennent des acides aminés encodés dans la cassette d'expression du vecteur utilisé pour la transfection des cellules CH27-EP-EPM. Les expériences pourront être effectuées avec la lignée cellulaire CH27-EP afin d'identifier et de caractériser les peptides naturels capables de reconstituer l'alloréactivité de la cellule T 2.102.

Type de document: Mémoire
Directeur de mémoire/thèse: Daniel, Claude
Mots-clés libres: cellule ; t ; rejet ; greffe
Centre: Centre INRS-Institut Armand Frappier
Date de dépôt: 26 sept. 2013 14:04
Dernière modification: 08 déc. 2015 15:20
URI: http://espace.inrs.ca/id/eprint/218

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